CellSafe-BioMycoX支原體PCR檢測試劑盒利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR），這是一種檢測細(xì)胞培養(yǎng)物和其他細(xì)胞培養(yǎng)物中支原體污染的Z高靈敏度選擇衍生生物制品。該引物組特異于支原體基因組,。這允許檢測口腔分枝桿菌、豬鼻分枝桿菌、精氨酸分枝桿菌,、發(fā)酵分枝桿菌、瘦骨精漿體萊德拉維,，人型分枝桿菌,，通常在細(xì)胞培養(yǎng)中作為污染物出現(xiàn),。此外，該試劑盒可以檢測M,。肺炎支原體,、唾液支原體、滑膜支原體和解脲原體種,。真核生物和細(xì)菌DNA未擴(kuò)增BioMycoX支原體PCR檢測試劑盒,。

艾美捷CellSafe-BioMycoX支原體PCR檢測試劑盒（#D-25, D-50, D-100）特點：

篩選研發(fā)細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染

高靈敏度檢測209種支原體

模板DNA：培養(yǎng)上清液煮沸或從培養(yǎng)細(xì)胞中提取基因組DNA

高靈敏度：10~100拷貝/反應(yīng)

特異性：不檢測與支原體有密切親緣關(guān)系的其他細(xì)菌種類

UDG系統(tǒng)：防止交叉污染

CellSafe-BioMycoX支原體PCR檢測試劑盒靈敏度：

使用此試劑盒進(jìn)行PCR的靈敏度為每個反應(yīng)10到100份目標(biāo)DNA拷貝。在實際培養(yǎng)樣本中檢測的靈敏度取決于樣本制備的質(zhì)量,。

預(yù)防交叉污染：

采取措施以Z小化從一個實驗到下一個實驗核酸的潛在交叉污染,。使用不同的工作區(qū)和移液管進(jìn)行模板制備和PCR設(shè)置步驟。

2X PCR主混合液中包含dUTP而非dTTP,。當(dāng)dUTP在PCR擴(kuò)增中取代dTTP時,，UNG處理（尿嘧啶-N-糖基化酶，HiSenseTM UDG熱敏感,，產(chǎn)品編號.SCU-100,，不在本試劑盒中提供）可以防止含有dU的PCR產(chǎn)物的后續(xù)再擴(kuò)增。UNG通過水解dU含有的DNA位點上的尿嘧啶-糖苷鍵,，作用于單鏈和雙鏈dU含有的DNA,。通過這種策略，交叉污染被消除,，而模板DNA（含有T的DNA）保持完整,。

預(yù)防交叉污染的注意事項：

在處理試劑盒中包含的陽性對照DNA時可能會發(fā)生交叉污染。為了防止交叉污染,，在PCR過程中處理陽性對照時使用不同的地點和移液管,。確保使用試劑盒中包含的PCR級水，并在實驗期間佩戴手套,。此外,，使用過濾吸頭以防止氣溶膠。

CellSafe-BioMycoX支原體PCR檢測試劑盒凝膠電泳結(jié)果：

使用定量的M. arginini（精氨酸菌）基因組DNA進(jìn)行測試

1. 100bp ladder

2. 104 copies

3. 103 copies

4. 102 copies

5. 101 copies

6. 1 copy

7. 陽性對照

8. 無模板對照

當(dāng)存在支原體污染時,，會出現(xiàn)大約250-300堿基對大小的條帶,。大約700堿基對的內(nèi)部控制DNA條帶表明PCR反應(yīng)正常進(jìn)行。

1) 建議通過添加1μl陽性對照DNA進(jìn)行無模板對照反應(yīng)和陽性對照反應(yīng),。

2) 如果PCR反應(yīng)受到高濃度的胎牛血清（FBS）抑制,，使用基因組DNA作為模板可能會有幫助。

3) PCR抑制物質(zhì)可能會在細(xì)胞培養(yǎng)基中積累（例如,，雜交瘤細(xì)胞等）,。在這種情況下，使用稀釋后的樣本或基因組DNA作為模板可能會有幫助。

4) 在嚴(yán)重的支原體污染情況下,，內(nèi)部控制DNA條帶可能不會出現(xiàn),。

CellSafe致力于提供支原體全面解決方案，可以有效檢測,、消除和預(yù)防影響細(xì)胞培養(yǎng)的支原體,。作為CellSafe在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的CellSafe產(chǎn)品,。