天然腔腸素是海腎熒光素酶（Rluc）和Gaussia熒光素酶（Gluc）等多種熒光素酶的作用底物,，也是水母發(fā)光蛋白的輔助因子，應(yīng)用非常廣泛,，可用于檢測(cè)活細(xì)胞中鈣離子濃度,，基因報(bào)告分析，BRET（生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移）研究，ELISA,，HTS,，以及組織或細(xì)胞中ROS水平的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。

艾美捷天然腔腸素（#303）參數(shù)：

中文別名 天然腔腸素,；腔腸素游離酸

英文別名 Renilla luciferin;Coelenterazine free base

分子式 C26H21N3O3

分子量 423.46

外觀 黃色固體

溶解性 溶于甲醇或者乙醇,，不可溶于DMSO

純度 ＞97%(TLC)

溶液配制：

對(duì)于所有進(jìn)行熒光信號(hào)檢測(cè)的試驗(yàn)建議溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。建議可用乙醇或丙二醇配制成儲(chǔ)存液（配制濃度可參考文獻(xiàn)推薦）,。在使用時(shí)需將儲(chǔ)存液用合適的緩沖液稀釋成工作液,。

注意：

1、在用蒸餾水或者PBS及其他的溶液進(jìn)行腔腸素儲(chǔ)存液的稀釋時(shí)需排除稀釋液中的氣泡,。同時(shí)工作液能呈弱酸性,，既可以減緩腔腸素的氧化，同時(shí)也可防止沉淀的析出,。但是弱酸也有可能對(duì)后續(xù)熒光強(qiáng)度RLU的檢測(cè)造成誤差,。

2、腔腸素的工作液不穩(wěn)定,，避免過夜保存,。

注意事項(xiàng)：

1、保存時(shí)若接觸空氣,，時(shí)間過久會(huì)使得腔腸素氧化,，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確性。

2,、對(duì)于儲(chǔ)存液的制備,，較穩(wěn)定的是保存于丙二醇中，同時(shí)可加入還原劑如L-抗壞血栓,，β-巰基乙醇,，DTT，DTE（二硫赤糖醇）,，或少量的鹽酸,。還原劑的存在可能會(huì)破壞熒光素酶的結(jié)構(gòu)，也會(huì)影響腔腸素的氧化速率,。

3,、腔腸素在醇類物質(zhì)中的冰凍保存可能會(huì)導(dǎo)致沉淀的析出（和濃度有關(guān)），可通過將溶液加熱至50～60℃至其溶解,。在使用前請(qǐng)確保眼觀無沉淀,。

4、Z適溶劑的選擇取決于多種因素,，如還原劑,。對(duì)于水母發(fā)光蛋白的檢測(cè)，可選用β-巰基乙醇,，因?yàn)榇诉€原劑能夠使水母發(fā)光蛋白更好地與腔腸素作用,。但對(duì)于Gluc蛋白的檢測(cè)，由于蛋白中含有5對(duì)二硫鍵,，在還原劑的存在狀態(tài)下不能夠檢測(cè)到熒光信號(hào),。

5、腔腸素在不同溶劑中的溶解特性：（單位：mg/mL）：

溶劑 室溫 60℃(Vortex)

Methanol 100% 46 70

Ethanol 100% 64 196

Propanol 100% 82 204

Butanol 100% 86 180

Propylene Glycol 24 240

b-Mercaptoethanol 160 268

注意：

1）腔腸素的丙二醇溶液在室溫下的溶解度較低,，但是在-70℃的狀態(tài)下沒有沉淀析出,。

2）腔腸素在β-巰基乙醇中的溶解度在室溫和60℃時(shí)都是最高的，但能夠穩(wěn)定存在的時(shí)間還有待進(jìn)一步測(cè)試,。

6,、當(dāng)使用多孔板進(jìn)行熒光值的檢測(cè)時(shí)，建議通過設(shè)置對(duì)照孔來消除由于腔腸素在工作液中不斷被氧化所帶來的誤差,。