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初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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牛血清白蛋白(BSA)在生化實(shí)驗(yàn)中的作用

時(shí)間:2022/3/18閱讀:763
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牛血清白蛋白(BSA)在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用例如在WB實(shí)驗(yàn)中加入BSA, 通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度,,對(duì)酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附,,能減輕有些酶的變性,,減輕不利環(huán)境因素如加熱,表面張力及化學(xué)因素引起的變性的,。

 

牛血清白蛋白測定蛋白濃度

按50:1配置BCA工作液,。10ulC液(蛋白標(biāo)準(zhǔn))+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。再分別以0,、1,、24,、8,、1216,、20ul將蛋白標(biāo)準(zhǔn)液加入96孔板的第1~8標(biāo)準(zhǔn)孔中,,在其他樣品孔中加入10ul待測樣品,。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液,,室溫放置2小時(shí),。用酶標(biāo)儀測定蛋白濃度:測定A562,依標(biāo)準(zhǔn)曲線算出蛋白濃度,。

 

牛血清白蛋白SDS-PAGE電泳

1 制 膠按比例配制分離膠,,緩緩地?fù)u動(dòng)溶液,使激活劑混合均勻,,將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃J中,,再在液面上小心注入一層水,以阻止氧氣進(jìn)入凝膠溶液中,,靜置40min,。同前按比例配制濃縮膠,但混勻溶液時(shí)不要過于劇烈以免引入過多地氧氣,。吸去不連續(xù)系統(tǒng)中下層分離膠上的水分,,連續(xù)平穩(wěn)的注入凝膠溶液,然后小心插入梳子并注意不得在齒尖留有氣泡,,靜制60min以上以保證*聚合,。

2 預(yù)電泳: 將聚合好的凝膠安置于電泳槽中,小心拔去梳子,,加入電泳緩沖液后低電壓10-20V的預(yù)電泳20-30min,。(目的是清除凝膠內(nèi)的雜質(zhì), 疏通凝膠孔徑以保證電泳過程中電泳的暢通),。

3 樣品準(zhǔn)備:首先計(jì)算上樣體積,,然后按樣品:上樣buffer=41的比例加入上樣bufer混勻,沸水10分鐘,,冰上5分鐘,。

4 加 樣: 預(yù)電泳后依次加入標(biāo)準(zhǔn)品(Marker)和待分析樣品。(加樣時(shí)間要盡量短,,以免樣品擴(kuò)散,,可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應(yīng)。每個(gè)泳道加5ul ,。

5 電 泳: 加樣完畢,,選擇80V恒壓進(jìn)行電泳,電泳直至溴酚藍(lán)染料前沿到達(dá)兩膠交界處(一般約20分鐘),,更換至100V恒壓電泳,,電泳直至溴酚藍(lán)染料前沿下至凝膠末端處,即停止電泳(一般約為1小時(shí)20分鐘)。

 

艾美捷牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,,例如在western blot中作為封閉試劑.血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用,、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用.在動(dòng)物細(xì)胞無血清培養(yǎng)中,,添加白蛋白可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用,。

 

艾美捷牛血清白蛋白粉末,熱處理,診斷級(jí)是以USDA認(rèn)證的牛源血漿作為原料,使用利的熱處理方法滅活蛋白酶并經(jīng)過進(jìn)一步的非溶液步驟去除脂肪和其它血漿蛋白.診斷級(jí)牛血清白蛋白粉末是專門用于減少可能會(huì)產(chǎn)生背景干擾以及細(xì)胞培養(yǎng)體系抑制等因素,,該牛血清白蛋白不含蛋白酶,,不含或具有很低活性的內(nèi)毒素、生物負(fù)載以及IgG,。

 

另外,該診斷級(jí)牛血清白蛋白可用于蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,、稀釋劑,、偶聯(lián)物或者酶穩(wěn)定劑,也可以應(yīng)用于高靈敏度的免疫分析實(shí)驗(yàn),、細(xì)胞培養(yǎng)以及雜交實(shí)驗(yàn)等.另有5kg以及10kg等更大規(guī)格包裝,,是目前高質(zhì)量牛血清白蛋白(BSA)科研用品。


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