293細(xì)胞系是從原代胚胎人類腎臟中建立的永丨久性細(xì)胞系人類腺病毒5型DNA,。腺病毒E1區(qū)（E1a和E1b）編碼的基因是在這些細(xì)胞中表達(dá),，并參與病毒啟動(dòng)子的反式激活,，使這些細(xì)胞產(chǎn)生高水平的蛋白質(zhì),。E1還補(bǔ)充了重組腺病毒載體中的E1缺失,，允許病毒復(fù)制,。我們的293/Cas9細(xì)胞系穩(wěn)定表達(dá)Cas9和嘌呤霉素抗性基因,。利用逆轉(zhuǎn)錄病毒將Cas9和嘌呤霉素抗性基因?qū)胗H代293細(xì)胞。

圖：293/Cas9細(xì)胞系表達(dá)Cas9蛋白,。293個(gè)細(xì)胞或293/Cas9細(xì)胞用RIPA緩沖液,，并使用Cell Biolab的Cas9 ELISA試劑盒（Cat#PRB-5079）檢測(cè)Cas9蛋白水平。

Cell Biolabs 艾美捷293細(xì)胞系培養(yǎng)方法：

從冷凍細(xì)胞建立293/Cas9培養(yǎng)基：

1.將10毫升完整的DMEM生長(zhǎng)培養(yǎng)基放入50毫升錐形管中,。解凍冷凍的食物在37°C水浴中輕輕攪拌,，在1-2分鐘內(nèi)冷凍細(xì)胞,。凈化空氣用70%（v/v）乙醇擦拭冷凍瓶表面。

2.將解凍的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到含有10mL生長(zhǎng)培養(yǎng)基的錐形管中,。

3.在室溫下以1000 rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘,，收集細(xì)胞。移除通過(guò)抽吸培養(yǎng)基,。

4.輕輕移液,，將細(xì)胞重新放入錐形管中的15毫升新鮮生長(zhǎng)培養(yǎng)基中然后倒下。

5.將15毫升細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到T-75組織培養(yǎng)瓶中,。將電池置于37°C的環(huán)境中培養(yǎng)箱中的二氧化碳濃度為5%,。

6.每天監(jiān)測(cè)細(xì)胞密度。細(xì)胞應(yīng)在培養(yǎng)物達(dá)到95%匯合時(shí)傳代,。

Cell Biolabs：細(xì)胞學(xué)試劑品牌,，為生物技術(shù)和研究類客戶提供基于細(xì)胞功能研究以及疾病等方面的技術(shù)和服務(wù)。主要涵蓋細(xì)胞研究,、細(xì)胞信號(hào)通路和蛋白質(zhì)生物學(xué),、代謝研究、病原體和毒素,、干細(xì)胞研究等領(lǐng)域,。

Cell Biolabs 相關(guān)研究方案：

1.CBA-100：細(xì)胞選擇™ 24孔細(xì)胞遷移試驗(yàn)（波頓室試驗(yàn)，比色法）

2.CBA-106：細(xì)胞選擇™ 96孔細(xì)胞遷移試驗(yàn)（Boyden小室試驗(yàn),，熒光法）

3.CBA-110：細(xì)胞選擇™ 24孔細(xì)胞侵襲試驗(yàn)（波頓室試驗(yàn),，比色法）

4.CBA-120：細(xì)胞選擇™ 24孔傷口愈合試驗(yàn)

艾美捷科技是Cell Biolabs的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù),。