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初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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目標(biāo)蛋白質(zhì)富集區(qū)域識(shí)別丨CUT&RUN Fast Kit解決方案

時(shí)間:2021/10/15閱讀:305
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CUT&RUN實(shí)驗(yàn)可以用來分析多種蛋白的染色質(zhì)圖譜,,包括PTMs,,轉(zhuǎn)錄因子,,染色質(zhì)remodelers和染色質(zhì)writers/readers,。

 

如果你對(duì)這個(gè)技術(shù)不是很熟悉,,建議你從細(xì)胞類型、實(shí)驗(yàn)條件,、對(duì)照,、抗體等方面來入手。這個(gè)試劑盒它可以兼顧多種細(xì)胞類型。

 

對(duì)于未固定的細(xì)胞,,是研究組蛋白PTMs和轉(zhuǎn)錄因子理想的實(shí)驗(yàn)材料,。這種細(xì)胞可以有多種來源,包括貼壁,、懸浮細(xì)胞,,組織樣品。

 

CUT&RUN也可以用lightly-crosslinked細(xì)胞,,樣品固定一般用于研究一些染色質(zhì)瞬時(shí)作用因子和某些PTMs,。也可以提取nuclei,這種方法用于研究那些量很少的PTMs和蛋白,。另外,,當(dāng)你的實(shí)驗(yàn)材料是免疫細(xì)胞時(shí),也推薦提取nuclei,,因?yàn)?span style="font-family: Calibri;">ConA beads可以激活某些免疫細(xì)胞,。

 

對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)化是整個(gè)實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。陽(yáng)性對(duì)照推薦使用H3K4me3或者H3K27me3,,;陰性對(duì)照推薦使用Rabbit IgG,。你還可以使用spike-in來進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。

 

在zui近的一項(xiàng)研究中,,佛羅里達(dá)大西洋大學(xué)和國(guó)家糖尿病,、消化和腎臟疾病研究所的科學(xué)家們利用CUT&RUN技術(shù)建立了一個(gè)功能性全基因組圖譜,該圖譜是一種稱為缺氧誘導(dǎo)因子的蛋白質(zhì)復(fù)合物的特異性結(jié)合位點(diǎn)—HIF1α,,位于人眼的晶狀體中,。該團(tuán)隊(duì)表示選擇CUT&RUN而不是ChIP-seq分析,是因?yàn)榍罢卟恍枰?span style="font-family: Calibri;">DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián),。此外,,與ChIP-seq相比,前者成功實(shí)驗(yàn)所需的細(xì)胞計(jì)數(shù)J低,。

 

正常而言,,隨著出生后眼睛的發(fā)育,,提供健康血液供應(yīng)的血管隨著時(shí)間的推移開始萎丨縮,。結(jié)果,眼睛中的氧氣含量穩(wěn)步下降,,造成缺氧環(huán)境,。HIF1α作為一種蛋白質(zhì)復(fù)合物,可調(diào)節(jié)身體對(duì)缺氧環(huán)境的反應(yīng),,這意味著它可以在晶狀體細(xì)胞發(fā)育和體內(nèi)平衡中發(fā)揮作用,。

 

該實(shí)驗(yàn)中收集的數(shù)據(jù)有助于建立眼晶狀體中HIF1αDNA復(fù)合物的個(gè)功能圖,同時(shí)也強(qiáng)調(diào)了健康晶狀體發(fā)育對(duì)HIF1α的需求。zui終,,CUT&RUN技術(shù)的這種成功應(yīng)用,,有助于接下來的大量研究,重點(diǎn)是了解某些蛋白質(zhì)可能對(duì)基因表達(dá)的作用,。

 

艾美捷作為表觀遺傳領(lǐng)域?qū)I(yè)的解決方案供應(yīng)商,,推薦EpiGentek的EpiNext CUT&RUN Fast Kit,cat#:P-2028,該試劑盒從低輸入提供無超聲破碎,,以可靠地識(shí)別真正的目標(biāo)蛋白質(zhì)富集區(qū)域并實(shí)現(xiàn)高分辨率定位,。可滿足您快速富集蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA并繪制全基因組蛋白質(zhì)/DNA相互作用的圖譜的需求,。

 


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