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熒光染料研究:PerCP-Cy5.5串聯(lián)染料方案

時間:2021/8/10閱讀:2406
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常見流式抗體熒光染料介紹

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1) 藻紅蛋白(phycoerythrin,,PE):PE是從紅藻中分離純化獲得的一種常見染料,,經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出橙黃色熒光,,zui大發(fā)射波長為575 nm,。PE具有吸光性能好和光量子產(chǎn)率高的特點,,可用于標記表達水平較低的蛋白,。在流式細胞術檢測中,,PE標記的抗體適用于所有配備488 nm氬離子激光器的流式細胞儀。

 

2) PE-Cy5:PE-Cy5是一種復合染料,,屬于藻紅蛋白偶聯(lián)物,,在此類復合染料中,激發(fā)能量可從PE傳遞到Cy5上,,zui大發(fā)射波長為667 nm,。由于PE-Cy5FITCPE在光譜上重疊范圍較少,,熒光干擾少,,因此實驗中常將PE-Cy5FITCPE搭配使用,。需注意,,PE-Cy5不適合與APC搭配使用,兩者熒光重疊大,。

 

3)PE-Cy5.5:PE-Cy5.5也是一種復合染料,,能量從PE傳遞到Cy5.5上,zui大發(fā)射波長為694 nm,。同PE-Cy5不一樣,,PE-Cy5.5FITCPE,、APC間熒光干擾小,,可搭配使用,且其熒光強度要優(yōu)于PE-Cy5,。

 

4) PE-Cy7:復合染料,,zui大發(fā)射波長為785 nmPE-Cy7FITC無光譜重疊,,與APC重疊也較少,,因此其可與FITCPE,、APC搭配使用,。在實驗中需要注意,PE-Cy7的光淬滅性很強,,需要避光環(huán)境,。

 

5) PerCP-Cy5.5:復合染料,zui大發(fā)射波長為695 nm。PerCP-Cy5.5光量子產(chǎn)率高,,可用于表達水平較低物質(zhì)的檢測,,與PerCP-Cy5.5相反,PerCP的光量子產(chǎn)率較低,,適用于表達水平較高物質(zhì)的檢測,,在雙激光管儀器上與APC共同檢測時,需要做補償調(diào)節(jié),,但比PerCP補償少,。

 

6) PI/7-AAD:碘化丙啶(propidium iodidePI)和7-AAD7-amino-actinomycin D)的zui大發(fā)射波長分別為617 nm647 nm,,是常見的熒光染料,,常用于細胞凋亡檢測,可用于鑒別死,、活細胞,。在大部分流式細胞儀上,PIFL2FL3通道檢測,,7-AADFL3通道檢測,。7-AADPI 有著相似的熒光特性,但其發(fā)射波譜較PI窄,,對其他檢測通道的干擾更小,,在多色熒光分析中是PI 替代品。

 

7) 別藻青蛋白(allophycocyanin,,APC):APCzui大發(fā)射波長為660 nm,,其標記的抗體適用于所有配備氦氖激光器的流式細胞儀,檢測通道一般是FL4通道,。FITC,、PEAPC搭配是經(jīng)典3色搭配。

 

8) Cy5:Cy5屬于小分子染料,,其zui大發(fā)射波長為670 nm,,其標記的抗體適用于所有配備633 nm氬離子激光器的流式細胞儀,檢測通道一般是FL4通道,。除流式細胞術外,,Cy5同樣適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術。需注意的是,,Cy5與單核細胞和粒細胞的非特異性結合多,,實驗結果容易出現(xiàn)假陽性。

 

9) 異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,,FITC):FITC是應用 廣泛的一種熒光素,,經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光,zui大發(fā)射波長為525 nm,。FITC的熒光強度受PH影響較大,,常隨著PH的降低而減弱,因此,,在使用FITC時需格外注意溶液的酸堿度,。

 

PerCP-Cy5.5串聯(lián)染料相關研究工具:

 

名稱

Cat#

規(guī)格

PE [R-Phycoerythrin]

2556

10mg

PE-Cy5 Tandem

2610

1mg

PE-Cy5.5 Tandem

2613

1mg

PE-Cy7 Tandem

2616

1mg

PE-Cy5.5 Tandem蛋白/抗體標記試劑盒

1316/1341

2 Labelings

APC [Allophycocyanin]

2554

1mg

APC-Cy5.5 Tandem

2622

1mg

APC-Cy7 Tandem

2625

1mg

PerCP-Cy5.5 Tandem

2650

1mg

APC-Cy5.5 Tandem 蛋白/抗體標記試劑盒

1320

2 Lalelings

 

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