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常見(jiàn)流式抗體熒光染料介紹:
1) 藻紅蛋白(phycoerythrin,,PE):PE是從紅藻中分離純化獲得的一種常見(jiàn)染料,經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出橙黃色熒光,,zui大發(fā)射波長(zhǎng)為575 nm。PE具有吸光性能好和光量子產(chǎn)率高的特點(diǎn),,可用于標(biāo)記表達(dá)水平較低的蛋白,。在流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)中,,PE標(biāo)記的抗體適用于所有配備488 nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀。
2) PE-Cy5:PE-Cy5是一種復(fù)合染料,屬于藻紅蛋白偶聯(lián)物,在此類復(fù)合染料中,,激發(fā)能量可從PE傳遞到Cy5上,,zui大發(fā)射波長(zhǎng)為667 nm。由于PE-Cy5與FITC、PE在光譜上重疊范圍較少,熒光干擾少,,因此實(shí)驗(yàn)中常將PE-Cy5與FITC、PE搭配使用,。需注意,PE-Cy5不適合與APC搭配使用,,兩者熒光重疊大,。
3)PE-Cy5.5:PE-Cy5.5也是一種復(fù)合染料,能量從PE傳遞到Cy5.5上,,zui大發(fā)射波長(zhǎng)為694 nm。同PE-Cy5不一樣,,PE-Cy5.5與FITC,、PE,、APC間熒光干擾小,可搭配使用,,且其熒光強(qiáng)度要優(yōu)于PE-Cy5。
4) PE-Cy7:復(fù)合染料,,zui大發(fā)射波長(zhǎng)為785 nm,。PE-Cy7與FITC無(wú)光譜重疊,與APC重疊也較少,,因此其可與FITC、PE,、APC搭配使用,。在實(shí)驗(yàn)中需要注意,,PE-Cy7的光淬滅性很強(qiáng),需要避光環(huán)境,。
5) PerCP-Cy5.5:復(fù)合染料,,zui大發(fā)射波長(zhǎng)為695 nm。PerCP-Cy5.5光量子產(chǎn)率高,,可用于表達(dá)水平較低物質(zhì)的檢測(cè),,與PerCP-Cy5.5相反,PerCP的光量子產(chǎn)率較低,,適用于表達(dá)水平較高物質(zhì)的檢測(cè),,在雙激光管儀器上與APC共同檢測(cè)時(shí),,需要做補(bǔ)償調(diào)節(jié),但比PerCP補(bǔ)償少,。
6) PI/7-AAD:碘化丙啶(propidium iodide,PI)和7-AAD(7-amino-actinomycin D)的zui大發(fā)射波長(zhǎng)分別為617 nm和647 nm,,是常見(jiàn)的熒光染料,,常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),,可用于鑒別死、活細(xì)胞,。在大部分流式細(xì)胞儀上,PI在FL2或FL3通道檢測(cè),,7-AAD在FL3通道檢測(cè),。7-AAD同PI 有著相似的熒光特性,,但其發(fā)射波譜較PI窄,,對(duì)其他檢測(cè)通道的干擾更小,在多色熒光分析中是PI的 替代品,。
7) 別藻青蛋白(allophycocyanin,,APC):APCzui大發(fā)射波長(zhǎng)為660 nm,其標(biāo)記的抗體適用于所有配備氦氖激光器的流式細(xì)胞儀,,檢測(cè)通道一般是FL4通道,。FITC、PE和APC搭配是經(jīng)典3色搭配,。
8) Cy5:Cy5屬于小分子染料,其zui大發(fā)射波長(zhǎng)為670 nm,,其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633 nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀,,檢測(cè)通道一般是FL4通道,。除流式細(xì)胞術(shù)外,,Cy5同樣適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù)。需注意的是,,Cy5與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞的非特異性結(jié)合多,,實(shí)驗(yàn)結(jié)果容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。
9) 異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,,FITC):FITC是應(yīng)用 廣泛的一種熒光素,經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光,,zui大發(fā)射波長(zhǎng)為525 nm,。FITC的熒光強(qiáng)度受PH影響較大,常隨著PH的降低而減弱,,因此,,在使用FITC時(shí)需格外注意溶液的酸堿度。
PerCP-Cy5.5串聯(lián)染料相關(guān)研究工具:
名稱 | Cat# | 規(guī)格 |
PE [R-Phycoerythrin] | 2556 | 10mg |
PE-Cy5 Tandem | 2610 | 1mg |
PE-Cy5.5 Tandem | 2613 | 1mg |
PE-Cy7 Tandem | 2616 | 1mg |
PE-Cy5.5 Tandem蛋白/抗體標(biāo)記試劑盒 | 1316/1341 | 2 Labelings |
APC [Allophycocyanin] | 2554 | 1mg |
APC-Cy5.5 Tandem | 2622 | 1mg |
APC-Cy7 Tandem | 2625 | 1mg |
PerCP-Cy5.5 Tandem | 2650 | 1mg |
APC-Cy5.5 Tandem 蛋白/抗體標(biāo)記試劑盒 | 1320 | 2 Lalelings |
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