褪黑素（Melatonin,，MT）是一種主要由松果體在夜間釋放的激素,，長(zhǎng)期以來(lái)一直與睡眠-覺(jué)醒周期的控制有關(guān)。褪黑素屬于吲哚雜環(huán)類(lèi)化合物,，又稱(chēng)為松果體素,、褪黑激素、褪黑色素,。褪黑素合成后,，儲(chǔ)存在松果體內(nèi)，交感神經(jīng)興奮支配松果體細(xì)胞釋放褪黑素,。褪黑素的分泌具有明顯的晝夜節(jié)律,，白天分泌受抑制，晚上分泌活躍,。

Abbexa褪黑素（Melatonin,，MT）ELISA試劑盒助力褪黑素研究：

試劑準(zhǔn)備：

1） 標(biāo)準(zhǔn)：用推薦的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液量配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，制成標(biāo)準(zhǔn)溶液,。然后使用標(biāo)準(zhǔn)稀釋液緩沖液,，按照協(xié)議的指示對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行串行稀釋。

2） 洗滌緩沖液：按照協(xié)議的規(guī)定,，用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液,。

3） 檢測(cè)試劑制備：計(jì)算所需工作液的總體積。用稀釋劑A和稀釋劑B分別在1:100稀釋檢測(cè)試劑A和檢測(cè)試劑B,。

分析程序：

1） 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn),、測(cè)試樣品和控制井。

2） 等分50µl將稀釋標(biāo)準(zhǔn)液注入標(biāo)準(zhǔn)井,。

3） 等分50µl標(biāo)準(zhǔn)稀釋液緩沖液注入對(duì)照（零）孔,。

4） 等分50µl將稀釋樣品注入樣品孔。

5） 立即等分50µ每口井注入1升檢測(cè)試劑A,。37℃孵育1小時(shí)°C

6） 洗3次,。

7） 等分100µ每口井注入1升檢測(cè)試劑B。37℃孵育30分鐘°C

8） 洗5次,。

9） 等分90µ每口井的TMB基板數(shù)量,。37℃孵育10-20分鐘°C

10）等分50µ我要停止解決問(wèn)題。

11）在450牛米處測(cè)量外徑,。

褪黑素（MT）ELISA試劑盒（#abx354613）檢測(cè)原理：

該試劑盒基于競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù),。抗體被預(yù)先包被在96孔板上,。將標(biāo)準(zhǔn)品,、測(cè)試樣品和生物素結(jié)合試劑添加到孔中并孵育。生物素標(biāo)記的MT與未標(biāo)記的MT之間發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)抑制反應(yīng),。然后加入HRP結(jié)合試劑,，并孵育整個(gè)培養(yǎng)皿。在每個(gè)階段使用洗滌緩沖液去除未結(jié)合的結(jié)合物,。TMB底物用于定量HRP酶促反應(yīng)。加入TMB基質(zhì)后,，只有含有足夠MT的孔才會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,，然后在加入酸性停止溶液后變?yōu)辄S色,。黃色的強(qiáng)度與鍍液中MT的結(jié)合量成反比。用分光光度法在450 nm的微孔板讀卡器中測(cè)量OD,，由此可計(jì)算MT的濃度,。

結(jié)果計(jì)算：

此分析具有競(jìng)爭(zhēng)性，因此樣品中的MT濃度與測(cè)量的吸光度呈負(fù)相關(guān),。用標(biāo)準(zhǔn)濃度（y軸）和測(cè)量的平均吸光度（x軸）的對(duì)數(shù)創(chuàng)建一個(gè)圖表,。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)應(yīng)用*擬合趨勢(shì)線。樣品的MT濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值,。

艾美捷小貼士：

僅供研究使用,。范圍和靈敏度可能會(huì)發(fā)生變化。隨時(shí)關(guān)注zui新信息,。為了獲得準(zhǔn)確結(jié)果,，必須將樣品濃度稀釋至試劑盒的中量程。