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翻譯后修飾(PTMs)試劑盒丨新手使用指南

時間:2021/5/14閱讀:374
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翻譯后修飾PTMs是對蛋白質(zhì)的動態(tài),、嚴(yán)格調(diào)節(jié)的改變,,它通過調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、空間定位和互作,、從而控制其功能,,PTMs主要包括磷酸化、甲基化,、乙酰化(Ac)、泛素化(Ub),、SUMO12/3等方式,,但還有許多其它的,PTMs的錯誤調(diào)節(jié)與癌癥、心力衰竭,、神經(jīng)和代謝性疾病等的進展有關(guān),。

PTM.png

 

蛋白質(zhì)發(fā)生PTM后,會顯著改變蛋白的理化及構(gòu)象,,從而直接改變蛋白的結(jié)合能力與功能,。因此,即使蛋白的表達水平?jīng)]有改變,,但如果翻譯后修飾的狀態(tài)發(fā)生改變,,蛋白的功能也會顯著變化。zui終,,PTM實現(xiàn)了蛋白質(zhì)功能的指數(shù)級擴增,。

 

PTM對蛋白功能影響是多樣性的,表現(xiàn)在以下三個方面:(1)同一蛋白質(zhì),,即使只發(fā)生一種類型的修飾,,也會賦予其多種功能;(2)同一個蛋白的同一種翻譯后修飾,,如果發(fā)生在不同的氨基酸上,,其功能也不同;(3)同一蛋白還可能具有不同的修飾,,其功能和參與的生物過程就更為復(fù)雜,。下圖以intermediate filament proteinIF蛋白)為例:

PTM-1.png

NatureReviews Molecular Cell Biology 15, 163–177 (2014)

 

蛋白修飾及功能的多樣性是維持機體復(fù)雜精準(zhǔn)調(diào)控的基礎(chǔ),但同時也給研究PTM的科研人員的研究造成了很多的困擾,,為什么蛋白質(zhì)翻譯后修飾的鑒定難度要遠遠高于未發(fā)生修飾的蛋白質(zhì)的鑒定了,,主要有以下幾點:

1.發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質(zhì)樣本量相對較少

2.發(fā)生修飾時形成的共價鍵非常不穩(wěn)定,且處于動態(tài)變化中

3.修飾與未修飾的蛋白及多種修飾形式的蛋白?;旌洗嬖?/span>

 

Signal-Seeker™ kit用于分析各種蛋白翻譯后修飾的情況:如賴氨酸乙?;⒎核鼗?、SUMO化,、磷酸化等修飾的鑒定及各種修飾的上調(diào)下調(diào)表達。使用親和磁珠從任何給定的細(xì)胞或組織裂解液中提取并富集修飾蛋白,。然后通過標(biāo)準(zhǔn)的Western blot程序分析濃縮蛋白群,,zui終用戶使用自身的抗體檢測所需的修飾蛋白。

 

Signal-Seeker™ kit應(yīng)用實例:

Signal-Seeker™試劑盒研究Rac1蛋白的單泛素化和多元泛素化

Signal-Seeker™.png

 來源:艾美捷科技

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