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調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(T-Reg細(xì)胞)是一種特殊的T細(xì)胞系,,對(duì)控制自身耐受和炎癥反應(yīng)至關(guān)重要,。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對(duì)于調(diào)節(jié)免疫穩(wěn)態(tài)和抑制不同疾病環(huán)境中的免疫反應(yīng)具有至關(guān)重要的作用,它能通過(guò)抑制CD4+輔助性T細(xì)胞和CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞的激活和分化,,對(duì)自體和腫瘤表達(dá)的抗原產(chǎn)生反應(yīng)性,。Treg細(xì)胞表達(dá)特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3,因而,,CD4+CD25+Foxp3+被認(rèn)為是Treg細(xì)胞的經(jīng)典標(biāo)記組合,。
但是問(wèn)題來(lái)了,選什么亞型,,選什么來(lái)源,,選什么熒光?
說(shuō)到這兒,,想必大家都很想知道,,CD4+CD25+FOXP3+Treg調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測(cè)試劑盒(TregFlowEx Kit)#ED7417能否解決這一難題呢?
CD4+CD25+FOXP3+Treg調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測(cè)試劑盒反應(yīng)種屬:人,;應(yīng)用類型:流式細(xì)胞術(shù),,FC;原理: 用于流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)人外周血或臍帶血中的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞Treg (CD4 + CD25 + FOXP3 +)的百分比,。
CD4+CD25+FOXP3+Treg調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測(cè)試劑盒組分:固定與裂解液,、破膜劑、封閉緩沖液,、CD4-FITC/CD25-PE抗體預(yù)混液,,以及FOXP3-APC抗體。
實(shí)驗(yàn)流程如下:
1.表面染色:
1.1在試管中添加10µl CD4 FITC/CD25 PE試劑,。
1.2添加100µl人血,。
1.3混合均勻,在冰箱(2−8℃)的黑暗中孵育10分鐘,。
1.4(可選清洗)洗滌池,,加入2mL冷PBS,在300 g下離心5分鐘,4℃,。
1.5吸入上清液,,立即進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)染色。
2.細(xì)胞內(nèi)染色
2.1加入1mL稀釋的冷固定和溶解液,。
2.2混合并在冰箱(2−8℃)黑暗中孵育10分鐘,。
2.3添加0.5mL滲透溶液。
2.4混合并在冰箱(2−8℃)黑暗中孵育10分鐘,。
2.5在400 g條件下,,4℃下將細(xì)胞離心5分鐘。(離心前,,請(qǐng)勿在固定/燙發(fā)混合物中添加任何其他緩沖液)
2.6去除(脫蠟)上清液,。
2.7添加50µL冷阻緩沖液。
2.8添加50µL冷PBS,。
2.9混合并在冰箱(2−8℃)的黑暗中孵育5分鐘,。
2.10加入5μl FoxP3 APC試劑。
2.11混合并在冰箱(2−8℃)的黑暗中孵育30分鐘,。
2.12. 用2ml冷PBS沖洗細(xì)胞兩次,,在400 g下離心5分鐘,4℃,。吸入/脫出上清液,。
2.13. 在PBS中加入300µl 1%甲醛,并將染色樣品存放在2−8℃下,,直到流式細(xì)胞儀測(cè)定,。4小時(shí)內(nèi)分析處理樣品。
結(jié)果展示:
使用TregFlowEx試劑盒中對(duì)人CD4陽(yáng)性淋巴細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)多色染色,。 Treg細(xì)胞(CD4 + CD25 + FOXP3 +)位于右上象限,。
文章來(lái)源:艾美捷科技
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