構(gòu)建表達(dá)載體的時(shí)候 ，我們要如何選擇合適自己實(shí)驗(yàn)需要的載體呢,？載體可分為病毒載體和非病毒載體,，病毒載體又分為慢病毒載體、腺病毒載體和腺相關(guān)病毒載體等,。下面來說說病毒載體中的慢病毒載體,。

一、慢病毒

逆轉(zhuǎn)錄病毒（Retrovirus）：是一種RNA病毒,，在復(fù)制時(shí)需在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下首先將RNA轉(zhuǎn)變?yōu)閏DNA,， 再在DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄,、翻譯等蛋白酶作用下擴(kuò)增,。主要包括RNA腫瘤病毒、慢病毒及泡沫病毒等三種亞科,。

慢病毒（Lentivirus）：屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科,，名稱源自該種病毒長達(dá)數(shù)年的潛伏期。

*經(jīng)典的慢病毒是由HIV病毒改造而來,，而且HIV-1/HIV-2系統(tǒng)也得到了廣泛的應(yīng)用,，除了HIV病毒系統(tǒng)以外，后續(xù)還有猿類免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency virus, SIV）載體系統(tǒng)、貓免疫缺陷病毒（felines immunodeficiency virus, FIV）載體系統(tǒng),、綿羊梅迪-維斯納病毒（MMV）載體系統(tǒng)和馬傳染性貧血(EIA）載體系統(tǒng)等,。

慢病毒的優(yōu)勢：

1.慢病毒攜帶的基因組可整合到宿主基因組，使宿主細(xì)胞長時(shí)間穩(wěn)定表達(dá)外源基因,；

2.可感染分裂和非分裂細(xì)胞,；

3.低免疫原性，直接注射活體組織不易造成免疫反應(yīng),，適用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn),；

4.可以更換特異性啟動(dòng)子；

5.野生型的HIV大小約為9.8 kb,，插入片段可長達(dá)5-6 kb,；

二、慢病毒載體

慢病毒載體（Lentivirus）是一類改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒載體,，是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,，基因組是RNA，其毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代,，屬于假型病毒,。可利用逆轉(zhuǎn)錄酶將外源基因整合到基因組中實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá),，具有感染分裂期與非分裂期細(xì)胞的特性,。

慢病毒載體的優(yōu)勢：

（1）表達(dá)時(shí)間長：慢病毒可將外源基因整合到宿主細(xì)胞基因組上，實(shí)現(xiàn)基因長時(shí)間穩(wěn)定的表達(dá),，不隨細(xì)胞分裂傳代而丟失,，是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的推薦，常用于構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株,。

（2）安全性高：未發(fā)現(xiàn)致病性,，慢病毒載體改造T細(xì)胞用于CAR-T細(xì)胞治療。

（3）免疫原性低：直接注射活體組織不易造成免疫反應(yīng),，適用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

三,、應(yīng)用

基因治療,；轉(zhuǎn)基因動(dòng)物；基因敲除,；藥物研究,；慢病毒載體能夠有效地感染培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞、肝細(xì)胞,、心肌細(xì)胞,、神經(jīng)元、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型原代細(xì)胞和大部分細(xì)胞系,；慢病毒的感染具有整合特性,，能夠?qū)⑼庠椿蛴行У卣系剿拗魅旧w上，因而可以達(dá)到持久性表達(dá),，從而構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,，用于基因的細(xì)胞功能研究；快速建立生產(chǎn)目的蛋白的細(xì)胞系,，非常有前途的真核表達(dá)方法,。

慢病毒載體（ORF、啟動(dòng)子,、shRNA）：ORF表達(dá)克隆,，shRNA克隆，miRNA前體表達(dá)克隆,，miRNA inhibitor克隆,，啟動(dòng)子報(bào)告克隆，CRISPR-Cas9相關(guān)克隆均可構(gòu)建,。

Cas9 核酸酶純化 Lentifect 慢病毒顆粒：Cas9核酸酶克隆表達(dá)按照人類密碼子優(yōu)化過的Cas9核酸酶基因,。Cas9切口酶克隆表達(dá)一個(gè)Cas9 D10A 切口酶基因。該切口酶是一個(gè)Cas9突變體,，第10位氨基酸從野生型的天冬氨酸突變成了丙氨酸,。

細(xì)胞永生化試劑：原代細(xì)胞經(jīng)過一定數(shù)量的增殖，和一定次數(shù)的分裂后達(dá)到復(fù)制衰老的狀態(tài),，從而限制了衰老或受損細(xì)胞的增殖,。GeneCopoeia提供細(xì)胞永生化試劑，利用重組慢病毒攜帶基因,，如simian virus 40 (SV40)大T抗原和人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶蛋白(hTERT)誘導(dǎo)永生化,，可顯著延長原代細(xì)胞的壽命。

慢病毒包裝試劑盒：Lenti-Pac™ HIV 表達(dá)包裝系統(tǒng)包括優(yōu)化的慢病毒包裝質(zhì)粒,，eGFP陽性對照質(zhì)粒,，EndoFectin™轉(zhuǎn)染試劑，增加病毒產(chǎn)量的TiterBoost™滴度增強(qiáng)劑,。該系統(tǒng)與GeneCopoeia的ORF,、shRNA、miRNA及Promoter克隆配套使用保證更高滴度和更高表達(dá)水平,。

慢病毒濃縮試劑盒：Lenti-Pac™ 慢病毒濃縮試劑是GeneCopoeia為用戶設(shè)計(jì)的用于快速,、簡便濃縮慢病毒顆粒的慢病毒濃縮試劑。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)只需將濃縮試劑與需濃縮的慢病毒上清液混合,，經(jīng)短暫孵育,，普通離心機(jī)離心即可。

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