單核苷酸多態(tài)性（Single Nucleotide Polymorphisms,，SNP）主要指基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，是人類可遺傳的變異中常見的一種,。SNP在人類基因組中廣泛存在,，平均每500~1000個堿基對中就有1個，估計其總數(shù)可達300萬個甚至更多,。SNP在CG序列上出現(xiàn)為頻繁,，而且多是C→T。

遺傳疾病診斷,、致病候選基因研究,、藥物篩選研究、分子標(biāo)記輔助育種,、群體遺傳研究等領(lǐng)域都會涉及到SNP分型分析,。

SNP基因分型的常見方法有：

Taqman 探針法、SNaPshot法,、飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS）分型,、HRM（高分辨率熔解曲線）分型等技術(shù)平臺。其中,，基于時間飛行質(zhì)譜（MALDI-TOF）完成的SNP檢測準(zhǔn)確率可達99.9%,，除了準(zhǔn)確性高、靈活性強,、通量大,、檢測周期短等優(yōu)勢外，有吸引力的應(yīng)該還是它的性價比,。飛行時間質(zhì)譜平臺（MALDI-TOF）是通用的基因單核苷酸多態(tài)性（SNP）的研究平臺,，該方法憑借其科學(xué)性和準(zhǔn)確性已經(jīng)成為該領(lǐng)域的新標(biāo)準(zhǔn)。

為此,，我們推薦使用Solis BioDyne,，增強摻入非常規(guī)核苷酸效率的TERMIPol ® DNA聚合酶，適合用于MALDI-TOF質(zhì)譜法和其他引物延伸平臺：

       * 如上TERMIPol DNA聚合酶產(chǎn)品均已通過了Bruker與 Agena BioScience平臺的驗證

以Agena 平臺為例：《MassARRA系統(tǒng)》

原理：首先通過PCR擴增出含有SNP位點的一段DNA（SNP位點前后各50bp左右）,，然后用SAP酶去除掉PCR 體系中剩余的脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）和引物,，然后加入一單堿基延伸引物，其3’末端堿基緊挨SNP位點,，采用四種ddNTP替代dNTP,。這樣，探針在SNP位點處僅延伸一個堿基,，連接上的ddNTP與SNP位點的等位基因?qū)?yīng),。用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS) 檢測延伸產(chǎn)物與未延伸引物間的分子量差異,，確定該點處堿基。

實驗流程如下：

1.PCR擴增含有目的SNP 的DNA序列,，并通過純化去除未結(jié)合的dNTPs

2.iPLEX單堿基延伸：純化后的PCR產(chǎn)物,，針對每個靶點SNP設(shè)計一條延伸引物，在以ddNTPs為底物的體系中進行單堿基延伸,，每個SNP的等位基因延伸產(chǎn)物僅為末端一個堿基的差異,。

3.純化，并將產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到SpectroCHIP芯片上,，進行質(zhì)譜檢測,，同一個SNP的等位基因由于分子量不同，形成不同的檢測峰而被區(qū)分,。  

Solis BioDyne的TERMIPol® DNA Polymerase將會用于上圖中的單核苷酸延伸中

已發(fā)表文章：  

【1】Bormann, Felix Georg et al. “Epigenetic regulation of Amphiregulin and Epiregulin in colorectal cancer.” International journal of cancer 144 3 (2019): 569-581 .

【2】Wilcke, Arndt et al. “The role of gene DCDC2 in German dyslexics.” Annals of dyslexia59 1 (2009): 1-11 .

【3】Ikryannikova, L N et al. “A MALDI TOF MS-based minisequencing method for rapid detection of TEM-type extended-spectrum beta-lactamases in clinical strains of Enterobacteriaceae.” Journal of microbiological methods 75 3 (2008): 385-91 . 【4】Sauer, Sascha et al. “Single-nucleotide polymorphisms: analysis by mass spectrometry.” Nature Protocols 1 (2006): 1761-1771.

 除了上述的的分子診斷神器,，Solis BioDyne為客戶提供終點PCR（end-point PCR），qPCR（real-time PCR）,，反轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse transcription）,，以及其它PCR所需的配套試劑。產(chǎn)品線縱覽圖如下：  

 Solis BioDyne來源于歐盟-愛沙尼亞共和國,，自1995年以來,，Solis BioDyne一直致力于開發(fā)和生產(chǎn)高品質(zhì)的生命科學(xué)試劑，現(xiàn)已成為當(dāng)今歐洲的試劑供應(yīng)商之一,。高標(biāo)準(zhǔn)的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)和服務(wù)使Solis BioDyne成為值得信賴的shouxuanPCR供應(yīng)商,。我們的DNA聚合酶，PCR Master Mixes,，qPCR Mixes和其它試劑被110多個國家的研究者所使用,，包括dingji研究機構(gòu)和生物技術(shù)公司,。

擁有dujia的蛋白質(zhì)穩(wěn)定技術(shù)zhuanli，確保其PCR酶與PCR Mixes產(chǎn)品具有*的穩(wěn)定性,，研究者可以常溫運輸以及常溫下配置PCR反應(yīng)體系（無需冰盒）,。即使是室溫放置30天，其酶活性也沒有損耗,。   作為Solis BioDyne在中國的區(qū)域總代理,，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的Solis BioDyne產(chǎn)品以及訂制服務(wù)。  

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