傳統(tǒng)檢測單糖,、雙糖的分析方法有化學法,、光譜法、GCMS、HPLC等方法,。其中化學法無法準確測定單種糖的含量,；光 譜法的工作繁瑣,、誤差比較大,；GC-MS方法需要進行衍生化反 應,，前處理復雜,，不利于快速分析；HPLC法雖然相比其他方法靈 敏度好,、檢測速度快,、適用范圍廣，但也存在檢出限較低,、抗干 擾能力差,，尤其對于食品中低濃度的單糖、雙糖很難進行的 測定,，無法滿足現(xiàn)階段對食品檢測快速,、靈敏、準確的要求,。LCMS/MS技術通過質譜的高選擇性和高靈敏度能夠降低目標物的檢 出限,、提高檢測的重現(xiàn)性。
由于糖類為水溶性化合物,，在常規(guī)的C18色譜柱上沒有保留,， 而采用其他填料的親水色譜柱也很難得到太好的峰形或分離度。 因此,，選取一款合適的分析糖的色譜柱是液質分析糖的實驗關鍵 點,。目前專門測試糖的糖柱通常為液相柱，需要用到100%純水 相來作為流動相,，并且流速通常高于1 mL/min,，這樣的色譜條件 對于大多數的質譜離子源來說都無法實現(xiàn)化合物的有效離子化， 或者只有通過分流才能實現(xiàn),，但是分流后將損失儀器的檢測靈敏 度,，失去了使用液質聯(lián)用儀測試糖的提高靈敏度的目的。
SCIEX 的 LC-MS/MS液質聯(lián)用系統(tǒng)的一大特點就是強大的 TurboV™離子源技術,，離子源的加熱能夠達到750℃,，ESI源耐受流速 范圍 5 µL/min～3.0 mL/min，APCI源耐受流速范圍50 µL/ min～3.0 mL/ min,，因此可以直接使用HPLC糖柱在SCIEX液質聯(lián)用儀上進行測試， 即實現(xiàn)了好的分離效果,，又提高了檢測靈敏度,。本實驗使用SCIEX Triple Quad™ 4500 質譜系統(tǒng)同時測定梨中的葡萄糖、果糖,、蔗糖 和山梨醇四種糖, 實驗方法簡單、靈敏度高,、選擇性好,。
實驗思路 1. 配制果糖,、葡萄糖、蔗糖和山梨醇標準曲線,，測試四種水溶性 糖的*低檢出限,； 2. 測試碭山酥梨果實中四種水溶性糖的含量，了解梨中四種糖的 比例關系,。
樣品處理 1．移取果糖、葡萄糖,、蔗糖和山梨醇標準品,，用純水稀釋，配制 成 50 ng/mL,、100 ng/mL、500 ng/mL,、1 µg/mL,、5 µg/mL 和 10 µg/mL 的標準溶液。 2．梨果實中可溶性糖的提取,。
梨果實中糖的提取
材料：碭山酥梨（采集于南京農業(yè)大學江浦園藝實驗站） 將樣品去皮削成小塊,，液氮速凍后儲存于-80冰箱。稱取2g樣 品,，加液氮研磨后,，加入80%乙醇7 mL混勻。在37℃水浴中恒溫 30 min,，超聲提取15 min，10000 r/min離心15 min,。將上清液移 入25 mL容量瓶,。重復提取3次，*后加入80%乙醇定容至25 mL,。 取2 mL溶液旋轉蒸發(fā)，用1 mL水溶解蒸干后的固體,，溶解時用超 聲波處理,，盡量溶解*,。溶液離心后，用0.22 µm水系濾膜處 理,，即可用于測定。 實驗過程中發(fā)現(xiàn)此前處理過程提取出的糖樣品在液質儀器上 的響應信號過高,，*終樣品又用純水稀釋10倍和1000倍分別上機 測試,。
色譜方法 色譜柱：Hi-Plex Ca, 300×7.7 mm； 流動相：100%純水洗脫 流速：1 mL/min,； 柱溫：85℃,； 進樣量：10 µL
具體可以到資料下載中心下載,，謝謝。
12
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務