細(xì)胞代號：

細(xì)胞名稱：

 CAL-78人軟骨肉瘤細(xì)胞??

組織來源：

對應(yīng)疾?。?/span>

生長特性：

細(xì)胞來源：

從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)

培養(yǎng)條件：

培養(yǎng)基：         DMEM         +10%FBS

氣相：空氣95%，二氧化碳5%

溫度：37℃

培養(yǎng)：

一,、貼壁細(xì)胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行2-3小時的緩沖,，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口,，將其中的培養(yǎng)液去掉,，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代,；

2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%,，需要對其進(jìn)行傳代，*次傳代比例為1:2,。

3傳代步驟：將0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yù)熱,，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS,，輕晃洗滌后棄去,。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶,，置于37°孵育消化（*次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為消化時間,，記錄消化時間,，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化,。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,，使之*脫落，然后收集細(xì)胞懸液,，1200rpm離心3min,，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，進(jìn)行傳代,。

二、懸浮細(xì)胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,，然后置于無菌操作臺,，打開瓶口，輕輕吹打后,，將其中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,，然后1200rpm離心3min，去上清,；

2.將離心好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中,，并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基，然后將其置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液（離心后去舊液,，加入新鮮培養(yǎng)基）,；

3.顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)目比較多時，對其進(jìn)行傳代,，*次傳代比例為1:2（離心后平均分成兩瓶培養(yǎng)）,。

細(xì)胞總數(shù)：

1~3*10⁶

傳代周期：

2-3天

傳代比例：

1:2~1:4

換液頻率：

2-3天

凍存液：

90%FBS+10%DMSO