細胞代號：

細胞名稱：

 A101D細胞,；人黑色素瘤細胞

組織來源：

對應疾?。?/span>

生長特性：

細胞來源：

從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進

培養(yǎng)條件：

培養(yǎng)基：         DMEM         +10%FBS

氣相：空氣95%，二氧化碳5%

溫度：37℃

培養(yǎng)：

一,、貼壁細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行2-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺,，打開瓶口,，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，根據細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代,；

2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進行傳代,，*次傳代比例為1:2,。

3傳代步驟：將0.25%含EDTA胰酶置于37°預熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS,，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預熱好的胰酶,，置于37°孵育消化（*次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為消化時間,，記錄消化時間,，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化,。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,，使之*脫落，然后收集細胞懸液，1200rpm離心3min,，棄上清,，加入*培養(yǎng)基重懸細胞，進行傳代,。

二,、懸浮細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒，然后置于無菌操作臺,，打開瓶口,，輕輕吹打后，將其中的細胞懸液轉移到離心管中,，然后1200rpm離心3min,，去上清；

2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中,，并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基,，然后將其置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液（離心后去舊液,，加入新鮮培養(yǎng)基）,；

3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時，對其進行傳代,，*次傳代比例為1:2（離心后平均分成兩瓶培養(yǎng)）,。

細胞總數：

1~3*10⁶

傳代周期：

2-3天

傳代比例：

1:2~1:4

換液頻率：

2-3天

凍存液：

90%FBS+10%DMSO