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細胞培養(yǎng)的基本原理與技術 現(xiàn)代生物技術一般認為包括基因工程技術,、細胞工程技術、酶工程技術和發(fā)酵工程技術,,而這些技術的發(fā)展幾乎都與細胞培養(yǎng)有密切關系,,特別是在醫(yī)藥領域的發(fā)展,細胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價值,。
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更新時間:2024/07/29 13:23:57瀏覽次數(shù):1137
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BICR56細胞,, 鱗狀細胞癌,扁平上皮癌細胞
1. 保存血清的方法?
建議血清應保存在-5℃至-2O℃,。然而,,若存放于4℃時,請勿超過一個月,。若您一次無法用完一瓶,,建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍,。
2. 如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
建議您將血清從冷凍箱取出后,,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融,。但必須注意的是,,融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),,該如何處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,,也會存在于血清中,,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,,并不影響血清本身的質(zhì)量,。若欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),,以400g稍微離心,,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,,因為它可能會阻塞您的過濾膜,。
4. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng),。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,,細胞和血小板釋放組胺,,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,,培養(yǎng)ES細胞,,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清,。
5. 有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,,而造成細胞生長速率的降低,。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,,而把血清放在37℃環(huán)境中,,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增,。
6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀?
GIBICO的胎牛血清沒有預老化,,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素,、纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質(zhì)量,。推薦在-20℃儲存胎牛血清,,避免反復凍融。
7. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
解凍血清時,,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),,若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,,使溫度及成分均一,,減少沉淀的發(fā)生,。請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,,血清會變得混濁,,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量,。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,,若非必要,可以無須做此步驟,。若必須做血清的熱滅活,,請遵守56℃,30分鐘的原則,,并且隨時搖晃均勻,。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,,都會造成沉淀物的增多,。
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