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賽默飛熱循環(huán)儀特點

閱讀:943        發(fā)布時間:2024/5/21
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  Thermo Fisher Scientific(賽默飛)的熱循環(huán)儀是一種用于進行聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)的實驗室設(shè)備,。以下是使用Thermo Fisher熱循環(huán)儀的具體方法和注意事項,。

  主要步驟

  1. 準備PCR反應(yīng)混合物

  在無菌環(huán)境中將以下試劑按照PCR反應(yīng)體系的要求混合在PCR管中:

  模板DNA

  正向引物和反向引物

  dNTPs(脫氧核苷三磷酸)

  PCR緩沖液

  MgCl2(如果緩沖液中不包含)

  Taq DNA聚合酶或其他熱穩(wěn)定DNA聚合酶

  無菌水

  2. 設(shè)置PCR儀參數(shù)

  根據(jù)實驗要求設(shè)置PCR儀的參數(shù),,包括:

  初始變性:95℃,,2-5分鐘

  循環(huán)參數(shù)(通常30-40個循環(huán)):

  變性:95℃,,30秒

  退火:50-65℃,,30秒(根據(jù)引物的Tm值調(diào)整)

  延伸:72℃,30秒-1分鐘(根據(jù)擴增片段的長度調(diào)整,,每1000 bp需1分鐘)

  最終延伸:72℃,,5-10分鐘

  保溫:4℃

  3. 加載PCR反應(yīng)管

  將準備好的PCR反應(yīng)管放入熱循環(huán)儀的模塊中,確保每個反應(yīng)管都放置牢固,,避免接觸不良,。

  4. 啟動熱循環(huán)儀

  選擇預(yù)設(shè)的程序或手動輸入上述設(shè)置,啟動PCR反應(yīng),。

  5. 監(jiān)控和完成反應(yīng)

  在PCR反應(yīng)進行過程中,,監(jiān)控儀器運行情況。反應(yīng)完成后,,熱循環(huán)儀會自動降溫到保溫溫度(通常為4℃)。

  6. 分析PCR產(chǎn)物

  反應(yīng)完成后,,通過瓊脂糖凝膠電泳等方法進行PCR產(chǎn)物分析,。

  熱循環(huán)儀的型號

  Thermo Fisher提供多種型號的熱循環(huán)儀,,常見的有:

  Applied Biosystems™ SimpliAmp™ Thermal Cycler

  Applied Biosystems™ Veriti™ Thermal Cycler

  Applied Biosystems™ ProFlex™ PCR System

  使用注意事項

  無菌操作:確保無菌環(huán)境,避免污染,。

  合理設(shè)置參數(shù):根據(jù)實驗需求優(yōu)化退火溫度和循環(huán)次數(shù),。

  試劑質(zhì)量:使用高質(zhì)量試劑,確保實驗結(jié)果的可靠性,。

  設(shè)備維護:定期校準和維護熱循環(huán)儀,,確保其正常運行。

  通過以上步驟,,你可以有效地使用Thermo Fisher熱循環(huán)儀進行PCR實驗,。每個型號的具體操作界面和功能可能略有不同,建議參閱設(shè)備的操作手冊以獲取詳細信息和指導(dǎo),。


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