您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
8
無血清細胞凍存液操作步驟
細胞凍存是細胞培養(yǎng)技術中細胞進行保種并長期保存的常用方法,，其中細胞凍存液,，作為細胞凍存時必須使用的一種溶液，不僅僅是說只是用來進行細胞的保存,，在細胞的購買,、寄贈,、交換和運送過程中也起著關鍵作用，因此選擇一款好的細胞凍存液就尤為重要,。
無血清細胞凍存液是指不含血清和動物源成分的細胞凍存液,，對比傳統(tǒng)細胞凍存液存在的優(yōu)勢：
1.是一種通用型的細胞凍存液，可用于凍存人和各種動物細胞株,；
2.凍存液配方,，即開即用，方便快捷,；
3.非程序降溫,，-80℃低溫冰箱長期凍存，也可液氮凍存,；
4.特別配方（主要成分為DMSO和氨基酸）具有有效提高細胞凍存活率和復蘇活力,；
5.不含動物來源性蛋白，能減少各類病毒,、霉菌和支原體等的污染,，確保凍存細胞安全；
6.可孔板（細胞培養(yǎng)板）凍存,，可用于雜交瘤細胞的凍存液.
無血清細胞凍存液操作步驟,，簡單、方便：
一,、細胞冷凍保存方法：
選擇凍存處于對數(shù)生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率,。
凍存管凍存方式：
1、按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中,。
2,、按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數(shù)。（參考：5×105至5×106 cells/ml）,。
3,、取相當于所需細胞數(shù)的細胞懸浮液量，置于離心管中,，離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000 rpm，4℃,，3~5 min）,。移去離心管中的上清液。
4,、加入適量無血清細胞凍存液于離心管中,，使細胞濃度為5×105至5×106 cells/ml。緩慢混合均勻,，制成細胞混合液,。
5,、將離心管中的細胞混合液分裝于已標示的冷凍保存管中。
6,、直接將含細胞懸液的凍存管放入-80℃冰箱,，冷凍保存。
7,、若研究者需要液氮保存時,，可先放入-80℃冰箱過夜后，再移至-196℃液氮罐,。
原位凍存方式：
1,、從培養(yǎng)狀態(tài)良好的細胞培養(yǎng)板中將培養(yǎng)基上清吸取干凈。
2,、加入適量無血清細胞凍存液于培養(yǎng)孔板中,，充分浸潤細胞。
3,、蓋上蓋板,，做好密封措施，防止染菌,。
4,、直接將含凍存液的細胞培養(yǎng)板放入-80℃冰箱，冷凍保存,。
二,、凍存細胞復蘇方法
凍存管復蘇方式：
1、從冰箱取出凍存細胞管,，立即放入37℃水浴槽中快速解凍,。
2、待凍存的細胞懸液融化后,，立即加入1 ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合,，再將細胞混合液從凍存管中移入含有9 ml該細胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻,。
3,、離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000 rpm，4℃,，3~5 min）,，移去上清液。
4,、清洗細胞,，充分洗凈殘留凍存液。
5,、加入適量新鮮培養(yǎng)基,，使用移液管緩緩地均勻細胞混合液,。適量地稀釋后，將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中,。
6,、鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進行細胞培養(yǎng),。
原位復蘇方式：
1,、從冰箱取出凍存培養(yǎng)板，立即放入37℃水浴槽中快速解凍,。
2,、待凍存的細胞懸液融化后，輕輕吸去細胞凍存液,，按照常規(guī)換液操作加入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)進行培養(yǎng),。