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細(xì)胞凍存前必須知道的無血清細(xì)胞凍存液使用方法
細(xì)胞凍存是細(xì)胞學(xué)研究中的重要內(nèi)容,，而細(xì)胞凍存液的配制及使用方法對于細(xì)胞凍存的成功率有著非常重要的影響,。傳統(tǒng)上，使用的是含有血清的細(xì)胞凍存液,，但是血清的存在也會(huì)引發(fā)各種細(xì)胞培養(yǎng)難題,，如批次之間的不一致性，提純與使用難度等等,。為解決這些問題,，近些年來，研究者們開發(fā)了不含血清的凍存液,，但是,，還不同于含有血清的凍存液有很多使用上的要點(diǎn)需要重視。
一,、無血清細(xì)胞凍存液的物質(zhì)
細(xì)胞凍存液的成分和pH值是影響細(xì)胞凍存的重要因素,。在無血清細(xì)胞凍存液中，3%甘油在保證細(xì)胞生存率的前提下,，能夠緩解細(xì)胞因凍存造成的壓力,。此外，DMSO,、乙二醇和PEG等復(fù)合凍存液的存在,，也影響細(xì)胞凍存后的生存率。因此,，在配制無血清細(xì)胞凍存液的時(shí)候,，需要注意成分的搭配，選擇合適的成分組合以及保證pH值的合理性,。
二,、無血清細(xì)胞凍存液的配制
在物質(zhì)的選擇基礎(chǔ)上，細(xì)胞凍存液的配制工作也非常關(guān)鍵,。首先需要選擇高質(zhì)量的無菌去離子水,，并將其高溫消毒。在消毒的過程中需要嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間,，以免富含礦物的水成分揮發(fā)或者水體中出現(xiàn)細(xì)菌,。其次,，將各種化學(xué)試劑按照一定比例搭配混合，調(diào)整pH值,，配制成凍存液,。在配制時(shí),，根據(jù)細(xì)胞的種類,、生長狀態(tài)以及所需要遭受的物理、化學(xué)刺激程度,，考慮不同配方時(shí)需要注意控制條件的嚴(yán)謹(jǐn)性以及方案的合理性,。
三、細(xì)胞的凍存方法
凍存是細(xì)胞凍存中的核心環(huán)節(jié),。在進(jìn)行凍存前,，需要掌握熟練的操作技巧，并在保證無菌條件的基礎(chǔ)上,，控制凍存過程的溫度和時(shí)間,，以確保凍存后細(xì)胞的完整和生存率。具體來說,，可以依次進(jìn)行以下步驟：
1.將細(xì)胞進(jìn)行離心處理,，去除培養(yǎng)基，加入凍存液混合均勻,；
2.按照一定比例分裝入凍存管中,，密封好，放入冰箱,，調(diào)低溫度,；
3.升級冰箱的溫度，待冷卻后,，放入冷凍機(jī)中,；
4.讓樣品緩慢地降溫至-80℃，在-80℃的溫度下,，待樣品逐漸進(jìn)入冬眠狀態(tài),；
5.將樣品轉(zhuǎn)入液氮罐中，保存在液氮罐內(nèi)的-196℃下,。
四,、細(xì)胞的解凍方法
解凍是細(xì)胞凍存的另一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。良好的解凍方法是保障細(xì)胞后續(xù)生長和研究的前提,。具體來說,，解凍時(shí)需要遵循以下基本規(guī)則：
1.使用預(yù)先洗凈的工具，為防止細(xì)菌引入,；
2.以恒溫水浴的方式進(jìn)行解凍,，溫度控制在37℃,；
3.解凍完成后，將細(xì)胞液勻加入到預(yù)先配置好的培養(yǎng)基中,；
4.對細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)?shù)臏囟?、溫度梯度和保護(hù)條件調(diào)節(jié)，進(jìn)行培養(yǎng),。
五,、無血清細(xì)胞凍存液使用的注意事項(xiàng)
無血清細(xì)胞凍存液使用時(shí)需要注意一些基本的操作細(xì)節(jié)，如：
1.在液氮罐中保存時(shí)間不宜過長,，建議在持續(xù)不超過半年或一年的情況下使用,；
2.凍存液可用于一定程序的連續(xù)凍存與解凍，但不能超過細(xì)胞耐受的極限,；
3.注意無血清細(xì)胞凍存液的配方和制備成分,，以及不同細(xì)胞的特殊要求；
4.合理利用凍存液的多余量,，以防使用中不夠,。
以上就是細(xì)胞凍存前必須知道的無血清細(xì)胞凍存液使用方法。在配制,、凍存,、解凍以及使用過程中，需要注意的方面非常多,，尤其是對于孕育具有特殊功能的細(xì)胞而言,，要想保證其活性，采用無血清細(xì)胞凍存液的使用方法,。除此之外,，還有其他方面需要詳細(xì)了解，相信在不斷的實(shí)踐中,，我們能夠更加熟練,、更加高效地開展細(xì)胞凍存工作。