GIBCO胰酶主要含胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶等,,胰蛋白酶能使蛋白轉(zhuǎn)化為蛋白胨,,胰淀粉酶使淀粉轉(zhuǎn)化為糊精與糖,胰脂肪酶則使脂肪分解為甘油和脂肪酸,。GIBCO胰酶的具體配置方法:
1,、培養(yǎng)液配制,方便好用,,對(duì)細(xì)胞影響小,,并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解
2、生理鹽水配制,,要先調(diào)ph值7.2到7.4(①胰酶(1:250)2.5克②EDTA-Na0.3克③NaCl8.0克④KCl0.4克⑤Glucose1.0克⑥PhenolRed0.005克⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時(shí),,調(diào)pH7.8-8.0,過(guò)濾除菌,。)
3,、pbs(0.1%胰酶溶液的配制:稱(chēng)取胰酶粉末0.1g,先用少許滅菌過(guò)的PBS調(diào)成糊狀,,然后補(bǔ)足到100ml,。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過(guò)夜,過(guò)濾滅菌,,分裝,,4℃保存?zhèn)溆谩#?或是hanks或是D-hanks液配制(1.稱(chēng)取胰蛋白酶粉末置燒杯中,,先用少許D-Hanks平衡鹽溶液(pH7.2左右)調(diào)成糊狀,,然后再補(bǔ)足D-Hanks平衡鹽溶液,攪拌混勻,,置室溫4小時(shí)或冰箱過(guò)夜,,并不斷攪拌振蕩;2.次日,,先用濾紙粗濾,,再進(jìn)行過(guò)濾除菌,,分裝入瓶中,低溫冰箱保存?zhèn)溆?,常用濃度?.25%或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸,,使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至7.2左右,。)
一般0.45微米的一次性濾器過(guò)濾除菌,至于作用效果,,需要消化一次細(xì)胞感覺(jué)一下,,因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣,有的作用溫和,,有的作用劇烈,。
4、是否需要四度放置過(guò)夜,,取決于你的胰酶的純度,。過(guò)去的胰酶純度不高,所以難以溶解,,需要四度過(guò)夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高,,就沒(méi)有必要四度過(guò)夜。從理論上來(lái)說(shuō),,四度放置過(guò)夜,,給細(xì)菌生長(zhǎng)的機(jī)會(huì),盡管過(guò)濾可以出去細(xì)菌,,可是出不掉其代謝產(chǎn)物。