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淺談GIBCO胰酶的具體配置方法
GIBCO胰酶是一種自豬胰中提取的多種酶的混合物,，主要為胰蛋白酶,、胰淀粉酶與胰脂肪酶。其通過在特定位置上降解蛋白,，使細(xì)胞間結(jié)合處蛋白降解,，這時細(xì)胞由于自身部細(xì)胞骨架的力作用下成為球形，從而使細(xì)胞分開,。作用時間根據(jù)細(xì)胞種類,、作用溫度、作用ph等因素而變化很大,，從幾分鐘到幾十分鐘不等,。配制時不能用含鈣、鎂離子的平衡液,，否則影響活性,。那么我們來看看GIBCO胰酶的具體配置方法：
1、培養(yǎng)液配制,，方便好用,，對細(xì)胞影響小，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解
2,、生理鹽水配制,，要先調(diào)ph值7.2到7.4（①胰酶（1：250）2.5克②EDTA-Na0.3克③NaCl8.0克④KCl0.4克⑤Glucose1.0克⑥PhenolRed0.005克⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時，調(diào)pH7.8-8.0,，過濾除菌,。）
3、pbs（0.1%胰酶溶液的配制：稱取胰酶粉末0.1g,，先用少許滅菌過的PBS調(diào)成糊狀,，然后補足到100ml。置室溫攪拌4小時或冰箱內(nèi)過夜,，過濾滅菌,，分裝，4℃保存?zhèn)溆?。?或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,，先用少許D-Hanks平衡鹽溶液（pH7.2左右）調(diào)成糊狀，然后再補足D-Hanks平衡鹽溶液,，攪拌混勻,，置室溫4小時或冰箱過夜，并不斷攪拌振蕩,；2.次日,，先用濾紙粗濾,，再進(jìn)行過濾除菌，分裝入瓶中,，低溫冰箱保存?zhèn)溆?，常用濃度?.25%或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸,，使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至7.2左右,。）
一般0.45微米的一次性濾器過濾除菌，至于作用效果,，需要消化一次細(xì)胞感覺一下,，因為不同廠家的酶不一樣，有的作用溫和,，有的作用劇烈,。
4、是否需要四度放置過夜,，取決于你的胰酶的純度,。過去的胰酶純度不高，所以難以溶解,，需要四度過夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高,，就沒有必要四度過夜。從理論上來說,，四度放置過夜,，給細(xì)菌生長的機會，盡管過濾可以出去細(xì)菌,，可是出不掉其代謝產(chǎn)物,。