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康寧基質(zhì)膠的使用方法
基底膜是以細胞為基礎(chǔ)的薄層細胞外基質(zhì),。康寧基質(zhì)膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取的基底膜基質(zhì),，其中含有約 60%層粘連蛋白,、30% IV 膠原和 8%的巢蛋白,。康寧基質(zhì)膠還含有基底膜聚糖,、TGF-ß、表皮生長因子,、類胰島素生長因子,、組織纖溶酶原及其他生長因子。
一,、使用方法
一,、使用方法
薄層凝膠法
1.依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì),。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻,。
2.將培養(yǎng)板放置在冰上,，以 50 µl/cm2向生長表面加入康寧基底膜基質(zhì)。
3.將培養(yǎng)板放置在 37 °C ,，30 分鐘,。
4.如果有必要的話，請在使用無血清培養(yǎng)基輕柔漂洗前吸出未結(jié)合的材料,。請確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面,。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。
厚層凝膠法
1.依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì),。使用預(yù)冷的移液管,，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2.將培養(yǎng)板放置在冰上。向康寧基底膜基質(zhì)中加入細胞并使用預(yù)冷的移液管懸浮,。以150-200 µl/cm2向生長表面加入康寧基底膜基質(zhì),。
3.將培養(yǎng)板放置在 37°C，30 分鐘?，F(xiàn)在可以添加培養(yǎng)基了,。細胞也可以培養(yǎng)在這一凝膠的頂部。
薄層包被法
1.依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì),。使用預(yù)冷的移液管,，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
2.使用無血清培養(yǎng)基將康寧基底膜基質(zhì)稀釋到需要的濃度,。對于您的應(yīng)用程序,，您應(yīng)該完成以經(jīng)驗為主的研究來確定您的最適包被濃度。
3.向被包被的容器中加入稀釋的康寧基底膜基質(zhì),。加入的量應(yīng)該足以容易地覆蓋整個生長表面,。在室溫下培養(yǎng) 1 個小時。
4.吸出未結(jié)合的材料并使用無血清培養(yǎng)基輕柔地漂洗,。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了,。