您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
會(huì)員.png)
8
貼壁細(xì)胞傳代及細(xì)胞凍存的方法
對于貼壁細(xì)胞傳代可參考以下方法：
1、棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2,、力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,，置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部 分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3,、按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者 瓶中,。
細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例：
1,、細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶,，細(xì) 胞變圓脫落后,，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
2,、1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,，加DMSO至終濃度為 10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存 管做好標(biāo)識(shí),。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3,、將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液 氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。