如何培養(yǎng)羊水細(xì)胞
采用如下方法做羊水細(xì)胞原位培養(yǎng)或按其它常規(guī)羊水細(xì)胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)羊水細(xì)胞:
1,、取羊水20ml,,以120xg離心十分鐘。
2,、在無菌操作臺(tái)操作,,棄上清液。
3,、加入2ml羊水培養(yǎng)基,,輕輕 混勻,制成細(xì)胞懸液,。
4,、取35mm培養(yǎng)皿,在蓋子上面及下半部側(cè)壁都做好標(biāo)記,。(包括編號(hào),、姓名、日期等)
5,、滴加0.5ml細(xì)胞懸液至培養(yǎng)皿中的蓋玻片(25px2)中央,,用移液管尖小心攤開。注意液體不能流出蓋玻片,。
6,、將培養(yǎng)皿置于5% CO2、濕度飽和的37度培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng),。
7,、24小時(shí)后,給每塊蓋玻片補(bǔ)加1.5ml培養(yǎng)基,。
8,、接種7天后觀察細(xì)胞。當(dāng)發(fā)現(xiàn)蓋玻片上細(xì)胞克隆數(shù)大于10個(gè),,每個(gè)克隆細(xì)胞數(shù)大于300且克隆邊沿細(xì)胞呈旺盛分裂狀態(tài)時(shí),,即可收獲細(xì)胞。否則,,繼續(xù)培養(yǎng)1~2天,。當(dāng)克隆邊沿細(xì)胞融合度大于90%,呈現(xiàn)停止分裂狀態(tài)時(shí),,意味細(xì)胞已經(jīng)老化,,不適合用作分析。
9、適合收獲的細(xì)胞按常規(guī)方法使細(xì)胞分裂停止在有絲分裂中期并制作細(xì)胞片,,經(jīng)吉姆薩染色處理后做染色體核型分析,。