人源細(xì)胞系作為體外模型而被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究,。正確數(shù)據(jù)的獲得常依賴于細(xì)胞系的特性,尤其是當(dāng)它用來替代其來源者的組織時,。
人源細(xì)胞系常規(guī)培養(yǎng)傳代流程:
?。?)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,,加2-3ml 0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時間,,通常控制在1-2min)
?。?)注意培養(yǎng)基PH值變化情況,,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存
?。?)取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,,添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
?。?)鏡下觀察消化情況,在HS505.T人淋巴結(jié)成纖維樣細(xì)胞生長特性邊緣縮小,,貼壁松動時(不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢让福?-8ml*培養(yǎng)基,,輕輕吹打細(xì)胞層,,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散,。
人源細(xì)胞系的培養(yǎng)注意事項(xiàng):
1.傳代培養(yǎng)時要注意無菌操作并防止細(xì)胞之間的交叉污染,,所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。每一種細(xì)胞使用一套器材,,培養(yǎng)用液應(yīng)嚴(yán)格分開,。
2.每天觀察細(xì)胞形態(tài),掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn):健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿,,折光性好,,生長致密時即可傳代。
3.如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象,,應(yīng)立即采取措施,,一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞,如果必須挽救,,可加含有抗生素的BSS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗,,隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗菌素,,并經(jīng)常更換培養(yǎng)基等,。
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