細(xì)胞培養(yǎng)中抗生素的作用
細(xì)胞培養(yǎng)起來感覺會很簡單,,但是有時候也會出現(xiàn)各種不順的問題 ,,例如:污染,生長緩慢,,變形,,死亡率過高…..,畢竟細(xì)胞是體外培養(yǎng)的,,在培養(yǎng)的時候會受到各種外界因素的影響,,培養(yǎng)基、血清,、孵育溫度,、C02濃度等,除此之外還有抗生素……
一般來說細(xì)胞培養(yǎng)是不需要加抗生素,,因為細(xì)胞培養(yǎng)必須要無菌操作,。如果實(shí)驗室污染嚴(yán)重,建議*打掃一下,,擦拭消毒,、熏蒸或者紫外照射殺菌。然后把細(xì)胞實(shí)驗涉及到的試劑都做下空培,,包括使用的胰酶,,胎牛血清等。如果實(shí)驗室無菌條件優(yōu)異,,細(xì)胞培養(yǎng)可以不加抗生素,,因為抗生素的藥效水平和毒性水平非常接近。特別是用于細(xì)胞治療的培養(yǎng),。
若當(dāng)心細(xì)胞感染,,可以適當(dāng)添加一些抗生素預(yù)防,如果已經(jīng)有污染,,建議按照以下方案添加:
1,、常用的是青霉素、鏈霉素聯(lián)合抑制細(xì)菌,,即所謂的“雙抗”,,主要針對革蘭氏陽性菌、陰性菌,;對于細(xì)菌的感染也可用慶大或卡那霉素,;
2、如果真菌污染嚴(yán)重,,可用兩性霉素/制霉菌素控制,;
3、若為支原體污染,, 可以用sciencell的支原體抑制劑,。在培養(yǎng)基中加入新鮮的支原體抑制劑溶液,,每3-4天更換一次。一兩周內(nèi)的足以消除污染,??梢杂行У目梢圆闅⒏鞣N原因感染的支原體。
抗生素多加對細(xì)胞無益,。加抗生素的主要問題是操作不慎造成的污染未必能及時發(fā)現(xiàn),,造成后期較大的損失。
青鏈霉素是廣譜抑菌劑,,對革蘭氏陰性和陽性細(xì)菌有抗菌性,,青霉素影響細(xì)菌細(xì)胞壁合成的終末步驟,在轉(zhuǎn)肽反應(yīng)步驟一直多肽鏈的延伸,;鏈霉素與核糖體的30S亞基單位結(jié)合,阻斷細(xì)菌蛋白質(zhì)的組成,。比較常用 ,。一般用于哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)。
一旦細(xì)胞污染,,處理辦法扔掉,,查找原因,全面預(yù)防,。如果細(xì)胞是經(jīng)過大量工作或高價才得到的,,扔掉實(shí)在可惜,可以針對污染源加抗生素,。也可以不加抗生素進(jìn)行單克隆有限稀釋至96孔板,,再克隆化。
但是污染帶來的實(shí)驗影響和損失不可估量,,主要的是平常都要做好細(xì)胞房的管理和消毒工作,。防止污染的發(fā)生。