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血清沉淀的正確處理方法
血清沉淀是什么？
血清中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀,，其成分有多種類型,，產(chǎn)生的原因有很多，主要有纖維蛋白,、磷酸鈣還有一些其它成分,。
1. 纖維蛋白（Fibrin）
血清中肉眼可見(jiàn)的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過(guò)程中,，血清采集,、過(guò)濾（3 次 0.1 μm過(guò)濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時(shí)血清中纖維蛋白原（Fibrinogen）處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集,，形成肉眼可見(jiàn)的沉淀,。
下圖是血清因反復(fù)凍融而造成纖維蛋白原的凝集
2. 磷酸鈣（Calcium Phosphate）
這是一種常見(jiàn)的沉淀成分，通常會(huì)造成血清出現(xiàn)云霧狀渾濁,。當(dāng)產(chǎn)品在 37℃保存時(shí),，這種現(xiàn)象尤其明顯，在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點(diǎn)的存在,。這些小黑點(diǎn)在布朗運(yùn)動(dòng)的作用下四處游動(dòng),，常被誤認(rèn)為是微生物污染。
3. 其他成分（Other）
血清中的其他成分也會(huì)形成沉淀,，例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等
血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎,？
1. 細(xì)胞生長(zhǎng)
我們?cè)诔鰪S前都會(huì)對(duì)血清進(jìn)行一系列質(zhì)檢測(cè)試，確保血清質(zhì)量達(dá)到嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn),。血清測(cè)試和細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)也表明,，其沉淀成分不會(huì)影響血清作為細(xì)胞培養(yǎng)添加物的表現(xiàn)。這一點(diǎn)得到了眾多客戶和其他血清供應(yīng)商的肯定,。解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集,，形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。
2. 懷疑污染
磷酸鈣顆粒經(jīng)常會(huì)被當(dāng)成微生物污染而引發(fā)不必要的擔(dān)憂,。一般情況下,，當(dāng)操作人員融化血清后注意到有霧狀渾濁時(shí)，常將其存放在 4℃冰箱中觀察,，并考慮接下來(lái)是否繼續(xù)使用,。但這樣會(huì)使沉淀進(jìn)一步增多，反而會(huì)使血清更加渾濁,，進(jìn)而誤以為存在血清污染,。并且,，在倒置顯微鏡下，可在血清中觀察到四處游動(dòng)的小黑點(diǎn)（磷酸鈣顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)）,，更容易使人誤以為存在微生物污染,。
為防止這類誤解的產(chǎn)生，我們不建議客戶培養(yǎng)血清來(lái)驗(yàn)證是否存在污染,，而是將血清直接接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),，以觀察是否有細(xì)菌的增殖。并且,，進(jìn)行革蘭氏染色,，并在油鏡（100 X 10 倍）下觀察可直接確認(rèn)是否存在微生物污染。
怎樣操作可以盡量避免沉淀出現(xiàn),？
1. 正確解凍
首先,，應(yīng)按照逐步解凍的方式正確解凍血清：從-20℃取出后，置于 4℃冰箱緩慢解凍,，后置于室溫完成解凍,。如果直接從-20℃拿到室溫或 37 ℃水浴解凍，則非常容易產(chǎn)生沉淀,。在解凍過(guò)程中，請(qǐng)注意時(shí)不時(shí)緩慢搖晃瓶子,，減少沉淀的產(chǎn)生,。為避免反復(fù)凍融，建議您將血清分裝使用,。
2. 使用和保存注意事項(xiàng)
血清沉淀很難預(yù)測(cè)和避免,，出現(xiàn)沉淀后也無(wú)需擔(dān)憂，這并不會(huì)影響血清的品質(zhì),。已知血清沉淀在以下條件下會(huì)有增多的可能：
1) 熱滅活,；
2) 37℃培養(yǎng)；
3) 反復(fù)凍融,；
4) 伽馬射線照射,；
5) 2-8℃長(zhǎng)期保存；
6) 長(zhǎng)期保存于可自動(dòng)化霜的冰箱中（溫度不穩(wěn)定）,。
血清沉淀的形成機(jī)理多種多樣,，具體的機(jī)理尚不十分明確。我們尚不能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)和控制血清沉淀的產(chǎn)生,。目前市面上所有品牌的血清產(chǎn)品都存在沉淀現(xiàn)象,，這一點(diǎn)可以在各品牌*網(wǎng)站上關(guān)于沉淀問(wèn)題的聲明上得到證實(shí)。
出現(xiàn)血清沉淀該如何處理,？
我們建議您采用2000 rpm 離心5分鐘,，取上清使用就好,，比過(guò)濾方便，不需要另外準(zhǔn)備濾心和針筒,，又不容易污染,。
總 結(jié)：
血清產(chǎn)品中出現(xiàn)沉淀屬于常見(jiàn)現(xiàn)象，但不會(huì)影響血清的品質(zhì),，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)而言也是沒(méi)有任何問(wèn)題的,，大家可以放心使用！