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血清沉淀的正確處理方法

閱讀:2435        發(fā)布時間:2020/3/5
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血清沉淀是什么?
血清中經(jīng)常會出現(xiàn)肉眼可見的沉淀,,其成分有多種類型,,產(chǎn)生的原因有很多,主要有纖維蛋白,、磷酸鈣還有一些其它成分,。

1. 纖維蛋白(Fibrin)
血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中,,血清采集、過濾(3 次 0.1 μm過濾)和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時血清中纖維蛋白原(Fibrinogen)處于溶解狀態(tài),。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集,,形成肉眼可見的沉淀。

下圖是血清因反復(fù)凍融而造成纖維蛋白原的凝集

2. 磷酸鈣(Calcium Phosphate)
這是一種常見的沉淀成分,,通常會造成血清出現(xiàn)云霧狀渾濁,。當(dāng)產(chǎn)品在 37℃保存時,這種現(xiàn)象尤其明顯,在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點的存在,。這些小黑點在布朗運動的作用下四處游動,,常被誤認(rèn)為是微生物污染。

3. 其他成分(Other) 
血清中的其他成分也會形成沉淀,,例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等

血清沉淀會影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎,?
1. 細(xì)胞生長
我們在出廠前都會對血清進行一系列質(zhì)檢測試,確保血清質(zhì)量達(dá)到嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn),。血清測試和細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗也表明,,其沉淀成分不會影響血清作為細(xì)胞培養(yǎng)添加物的表現(xiàn)。這一點得到了眾多客戶和其他血清供應(yīng)商的肯定,。解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集,,形成肉眼可見的沉淀。
2. 懷疑污染
磷酸鈣顆粒經(jīng)常會被當(dāng)成微生物污染而引發(fā)不必要的擔(dān)憂,。一般情況下,,當(dāng)操作人員融化血清后注意到有霧狀渾濁時,常將其存放在 4℃冰箱中觀察,,并考慮接下來是否繼續(xù)使用,。但這樣會使沉淀進一步增多,反而會使血清更加渾濁,,進而誤以為存在血清污染,。并且,在倒置顯微鏡下,,可在血清中觀察到四處游動的小黑點(磷酸鈣顆粒的布朗運動),,更容易使人誤以為存在微生物污染。
為防止這類誤解的產(chǎn)生,,我們不建議客戶培養(yǎng)血清來驗證是否存在污染,,而是將血清直接接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),以觀察是否有細(xì)菌的增殖,。并且,,進行革蘭氏染色,并在油鏡(100 X 10 倍)下觀察可直接確認(rèn)是否存在微生物污染,。

怎樣操作可以盡量避免沉淀出現(xiàn),?
1. 正確解凍
首先,應(yīng)按照逐步解凍的方式正確解凍血清:從-20℃取出后,,置于 4℃冰箱緩慢解凍,,后置于室溫完成解凍。如果直接從-20℃拿到室溫或 37 ℃水浴解凍,,則非常容易產(chǎn)生沉淀,。在解凍過程中,,請注意時不時緩慢搖晃瓶子,,減少沉淀的產(chǎn)生,。為避免反復(fù)凍融,建議您將血清分裝使用,。
2. 使用和保存注意事項
血清沉淀很難預(yù)測和避免,,出現(xiàn)沉淀后也無需擔(dān)憂,這并不會影響血清的品質(zhì),。已知血清沉淀在以下條件下會有增多的可能:
1) 熱滅活,;
2) 37℃培養(yǎng);
3) 反復(fù)凍融,;
4) 伽馬射線照射,; 
5) 2-8℃長期保存; 
6) 長期保存于可自動化霜的冰箱中(溫度不穩(wěn)定),。
血清沉淀的形成機理多種多樣,,具體的機理尚不十分明確。我們尚不能準(zhǔn)確預(yù)測和控制血清沉淀的產(chǎn)生,。目前市面上所有品牌的血清產(chǎn)品都存在沉淀現(xiàn)象,,這一點可以在各品牌*網(wǎng)站上關(guān)于沉淀問題的聲明上得到證實。

出現(xiàn)血清沉淀該如何處理,?
我們建議您采用2000 rpm 離心5分鐘,,取上清使用就好,比過濾方便,,不需要另外準(zhǔn)備濾心和針筒,,又不容易污染。

總 結(jié):
血清產(chǎn)品中出現(xiàn)沉淀屬于常見現(xiàn)象,,但不會影響血清的品質(zhì),,對細(xì)胞培養(yǎng)而言也是沒有任何問題的,大家可以放心使用,!

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