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動(dòng)物血清的常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法
動(dòng)物血清的常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法！
近在培養(yǎng)細(xì)胞中使用胎牛血清,由于發(fā)現(xiàn)有沉淀,不知是否變質(zhì),在查閱相關(guān)文獻(xiàn)也沒(méi)有得到確切的答案.因此不敢再用原來(lái)的血清,導(dǎo)致浪費(fèi).在這提醒大家做細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),要注意血清的分裝.
血清是細(xì)胞培養(yǎng)中重要的元素之一,。在實(shí)驗(yàn)室操作中要注意的事項(xiàng)及處理方法如下：
1. 血清保存 : 建議血清應(yīng)保存在-5至-2O,。然而，若存放于4時(shí),，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月,。若您一次無(wú)法用完一瓶，建議您無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),，再放回冷凍,。
2. 解凍血清的方法 : 建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8冰箱使之融解,，然后在室溫下使之全融,。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。
3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),，該如何處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但常見(jiàn)的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,，并不影響血清本身的質(zhì)量,。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾,。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過(guò)濾膜。
4. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺,，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞,，昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),，推薦使用熱滅活血清,。
5. 有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或*沒(méi)有任何作用,，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”,，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,，而把血清放在37環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多,，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增,。
因此我們建議您，若非必須,，您可以不需要做熱處理這一步,。如此一來(lái)，不但節(jié)省您寶貴的時(shí)間,，更確保血清的質(zhì)量!
6. 為什么儲(chǔ)存在冰箱中的胎牛血清會(huì)出現(xiàn)沉淀?
胎牛血清沒(méi)有預(yù)老化,，儲(chǔ)存在2－8時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素,、纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。這應(yīng)該不會(huì)影響血清的質(zhì)量,。推薦在－20儲(chǔ)存胎牛血清,，避免反復(fù)凍融。
7. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
解凍血清時(shí),，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20至4至室溫),，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20至37)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。
解凍血清時(shí),，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生,。
請(qǐng)勿將血清置于37太久。若在37放置太久,，血清會(huì)變得混濁,，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,，而影響血清的質(zhì)量。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要,，可以無(wú)須做此步驟。
若必須做血清的熱滅活,，請(qǐng)遵守56,，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻,。溫度過(guò)高,，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多,。