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原代細(xì)胞傳代技術(shù)
一,、貼壁細(xì)胞的消化法傳代
1,、吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,。
2,、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
3,、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察,，發(fā)現(xiàn)原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí),，棄去消化液,，加入培養(yǎng)液終止消化。
4,、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,，分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況,。
二、懸浮細(xì)胞的傳代
1,、直接傳代
① 讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,，將上清吸掉1/2-2/3。
② 用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后,，分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2,、離心法傳代
① 將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),，離心800-1000rpm，5分鐘,。
② 去除上清,，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，用吸管吹打使之形成細(xì)胞懸液,。
③ 將細(xì)胞懸液分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。