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杭州仟諾生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>大鼠腎細胞 (NRK-52E)

大鼠腎細胞 (NRK-52E)

閱讀:1756        發(fā)布時間:2019/9/26
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細胞特性

1) 來源:大鼠,,正常腎

2) 形態(tài)上皮細胞,,貼壁生長

3) 含量:>1x106 個/mL

4) 污染:支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式:1干冰運輸,,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;2存活細胞,,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

收到細胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,,請及時拍照與我們聯(lián)系,。

 

細胞接受后的處理:

1) 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染,,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2) 在顯微鏡下確認(rèn)細胞生長狀態(tài)時,,在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,,能準(zhǔn)確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下,,同時給細胞拍照各2-3張(10×,20×都要拍照),,作為售后的依據(jù),。

3) 觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,。

4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基)。

6)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后第1次傳代建議1:2傳代 。

 

細胞用途:僅供科研使用,。

                       

本公司細胞培養(yǎng)操作規(guī)程,,供參考

一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM(推薦iCell-0001)培養(yǎng)基;小牛血清,,10%,;添加10ng/ml EGF;雙抗,,1%,。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3) 凍存液90%血清,,10%DMSO現(xiàn)用現(xiàn),。

二. 細胞處理

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子PBS潤洗細胞1-2

2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化

3. 輕輕打后吸出,,移入15ml離心管中,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)

第1次傳代推薦傳代比例為1:2,,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

3) 細胞凍存:細胞生長狀態(tài)良好時,進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,,先要消化處理并進行細胞計數(shù)消化方法按照細胞傳代方法的1-3驟進行,,后的重懸液使用血清,。懸浮細胞直接計數(shù)后離心,用血清重懸浮,,DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106細胞凍存,。

下面T25瓶為例,;

      1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

      21000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,,加DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

 

 

注意事項:

1. 收到細胞后,,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,,請立即與我們聯(lián)系

2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性,,必須在二級生物安全內(nèi)操作,,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

 

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