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細(xì)胞培養(yǎng)新手應(yīng)該注意的地方
培養(yǎng)細(xì)胞是醫(yī)學(xué)研究生的基本功,。細(xì)胞嬌貴，一不小心容易出問題,。作為新手培養(yǎng)細(xì)胞要注意那些呢,。
1、不要燒瓶口,。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑,？知道為什么嗎,？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系,。瓶口在火焰上的時候,，熾熱的空氣進(jìn)入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后,，空氣變冷,，壓力驟降,，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉(zhuǎn)化成二氧化碳，釋放出來,。培養(yǎng)基中的碳酸少了,，當(dāng)然會變堿。如果不燒瓶口的話,，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢,。（當(dāng)然多多少少還是會有一點(diǎn)越用越堿，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高）
其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰,。不妨試一下把手指在火上晃幾下,，你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼。如果有細(xì)菌的話,，這么晃兩下也燒不死多少,。要想燒死全部細(xì)菌，除非把瓶口和塞子燒紅,。
2,、 不要頻繁看細(xì)胞。對于初學(xué)者而言,，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣,，有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好,，就越是經(jīng)常去看,。實(shí)際上看細(xì)胞對細(xì)胞的生長沒有任何好處，特別是對原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后,，密度特別低的細(xì)胞,。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長的因子在其周圍,，形成有利于生長的局部環(huán)境,。你跑去看細(xì)胞，培養(yǎng)瓶這么一晃,，把因子都給晃散了,。新手一天到晚看細(xì)胞，細(xì)胞老是長不好,。老手細(xì)胞一扔好幾天不管,，細(xì)胞瘋長。
3,、 不要怕消化,。在傳代的時候，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過度，早早地終止消化,。細(xì)胞沒下來就使勁吹燈,，吹得滿瓶子都是氣泡。一般看來,，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大,。做血管平滑肌原代的時候,，37度消化過夜,，細(xì)胞也沒事。通常等細(xì)胞*變圓后才中止消化,。細(xì)胞輕輕一晃就能下來,。還有，動作要輕柔,，盡量不要產(chǎn)生氣泡,。氣泡在破裂時的機(jī)械應(yīng)力相當(dāng)大，對細(xì)胞的傷害也是很大的,。