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通用細(xì)胞凍存液操作步驟以及注意事項
通用細(xì)胞凍存液操作步驟以及注意事項
隨著實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展,，除了原代培養(yǎng)之外,，人工開發(fā)出來的細(xì)胞系的保存越來越重要,。冷凍保存細(xì)胞系的優(yōu)點(diǎn)如下：1,、減少基因漂移,；2、減緩細(xì)胞系的衰老,；3,、穩(wěn)定表型；4,、減少微生物污染及交叉污染機(jī)會等,。細(xì)胞冷凍的原理在于盡可能降低細(xì)胞內(nèi)的晶體形成，減少細(xì)胞內(nèi)水凝固所形成的高濃度溶質(zhì)對細(xì)胞造成的低溫?fù)p傷,，從提高細(xì)胞復(fù)蘇時的存活率,。細(xì)胞凍存的數(shù)量應(yīng)保證復(fù)蘇時低溫保護(hù)劑獲稀釋，稀釋后的細(xì)胞濃度扔高于正常傳代的細(xì)胞濃度為宜,，這是因?yàn)楫?dāng)?shù)蜏乇Ｗo(hù)劑稀釋以后,，該濃度一般不會對細(xì)胞造成毒性損傷,。
Leagene 通用細(xì)胞凍存液主要由FBS、DMSO等組成,，是非常經(jīng)典的一種無菌凍存液,。用于各種哺乳動物原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞系,、雜交瘤細(xì)胞等的凍存,。
自備材料：
1、 細(xì)胞計數(shù)器 2,、 細(xì)胞凍存管 3,、 超低溫冰箱或液氮 4、 超凈工作臺
操作步驟:
1,、培養(yǎng)細(xì)胞至對數(shù)生長晚起,，顯微鏡觀察其外觀、形態(tài),、有無污染等,，取狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行凍存操作。如為貼壁生長細(xì)胞,，用胰蛋白酶消化并用*培養(yǎng)基終止消化,，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)；如為懸浮生長細(xì)胞,，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù),。
2、離心,，棄上清
3,、加入適量的通用細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞,，使細(xì)胞濃度達(dá)到,、ml，置于凍存管中,，密封,，不要擰的太緊，避免彎曲變形,。
4,、一般進(jìn)行凍存。亦可采用-20℃30min,，-70℃過夜,，后置于液氮罐中長期存儲。
注意事項：
1,、注意在超凈工作臺內(nèi)無菌操作,，盡量避免污染。
2,、初次使用融化后可在4℃保存1個月,，單應(yīng)減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效,。
3,、雜交瘤細(xì)胞凍存時應(yīng)定期復(fù)蘇，檢查細(xì)胞的活性和分泌抗體的穩(wěn)定性,。
4,、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作