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當(dāng)前位置:上海易匯生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>GE Life FICOLL PAQUE PLUS高效淋巴細(xì)胞分離
密度梯度離心原理:血液中各類細(xì)胞的密度存在差異 ,,紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞比重較大,約為 1.092,,而淋巴細(xì)胞和單個核細(xì)胞比重相對較小,,在 1.075 左右。FICOLL PAQUE PLUS 的密度精準(zhǔn)控制在 1.077±0.001 g/mL,,這一密度恰好介于紅細(xì)胞和淋巴細(xì)胞之間,。當(dāng)含有多種細(xì)胞的血液樣本與 FICOLL PAQUE PLUS 混合后進(jìn)行離心時,不同細(xì)胞會依據(jù)自身密度在離心力的作用下,,在分離液中形成不同的層次,,從而實現(xiàn)細(xì)胞的分離。
成分協(xié)同作用:其主要成分包括 9.0% (w/v) 的泛影葡胺鈉,、5.7% (w/v) 的 Ficoll PM400 以及 0.0231%(w/v) 的依地酸鈣鈉 ,。泛影葡胺鈉可增加溶液的密度,有助于形成穩(wěn)定的密度梯度,;Ficoll PM400 作為一種高分子量蔗糖聚合物,,能促進(jìn)紅細(xì)胞的凝集,使得紅細(xì)胞在離心過程中更容易沉淀,,從而與淋巴細(xì)胞更好地分離,;依地酸鈣鈉則起到抗凝作用,防止血液樣本在分離過程中發(fā)生凝固,,保證細(xì)胞的完整性和活性,。
高純度與高回收率:使用 FICOLL PAQUE PLUS 分離淋巴細(xì)胞,所得單核細(xì)胞含量可達(dá) 95 ±5% ,,淋巴細(xì)胞得率為 60 ± 20%,。這意味著科研人員能夠從外周血樣本中獲取到高純度的淋巴細(xì)胞,且細(xì)胞的回收率較高,,為后續(xù)實驗提供了充足且優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞材料,。無論是進(jìn)行淋巴細(xì)胞功能研究,還是基于淋巴細(xì)胞的細(xì)胞治療探索等,,高純度和高回收率的淋巴細(xì)胞樣本都至關(guān)重要,,能有效減少雜質(zhì)細(xì)胞對實驗結(jié)果的干擾,提高實驗的準(zhǔn)確性和可靠性,。
良好的細(xì)胞活力維持:該產(chǎn)品在分離過程中能很好地維持淋巴細(xì)胞的活力 ,,細(xì)胞存活率可達(dá) 95 ±5%。這得益于其溫和的分離條件以及對細(xì)胞無明顯毒性的成分,。高活力的淋巴細(xì)胞對于需要細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),、增殖或功能檢測的實驗尤為關(guān)鍵,如淋巴細(xì)胞的體外刺激實驗、細(xì)胞因子分泌檢測等,,只有保持細(xì)胞的高活力,,才能真實反映淋巴細(xì)胞在生理狀態(tài)下的功能和特性。
低內(nèi)毒素水平:FICOLL PAQUE PLUS 的內(nèi)毒素水平極低,,小于 0.12 EU/mL ,。內(nèi)毒素的存在可能會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用,影響細(xì)胞的正常生理功能,,進(jìn)而干擾實驗結(jié)果,。低內(nèi)毒素水平保證了分離得到的淋巴細(xì)胞不受內(nèi)毒素的污染和干擾,對于一些對內(nèi)毒素敏感的實驗,,如細(xì)胞培養(yǎng),、免疫細(xì)胞功能研究等,能夠提供更純凈,、可靠的細(xì)胞樣本,,確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
操作簡便快速:基于 Boyum 發(fā)展的方法,,使用 FICOLL PAQUE PLUS 進(jìn)行淋巴細(xì)胞分離僅需簡單快速的離心操作 ,。科研人員只需將適量的血液樣本小心鋪加在 FICOLL PAQUE PLUS 分離液上方,,然后放入離心機(jī)中,,按照推薦的離心條件進(jìn)行離心,即可實現(xiàn)細(xì)胞的分層分離,。整個操作過程無需復(fù)雜的設(shè)備和繁瑣的步驟,,即使是實驗新手也能快速上手,大大提高了實驗效率,,節(jié)省了科研時間,。
對比維度 | FICOLL PAQUE PLUS | 紅細(xì)胞裂解液法 | 流式細(xì)胞分選法 | 磁珠分選法 |
分離純度 | 單核細(xì)胞含量 95 ±5% | 純度較低,易殘留雜質(zhì) | 純度高,,但可能存在損失 | 純度較高,,特異性強(qiáng) |
細(xì)胞活力 | 存活率 95 ±5% | 對細(xì)胞有一定損傷 | 操作復(fù)雜,影響活力 | 可能影響細(xì)胞功能 |
操作難度 | 簡單,,僅需離心 | 步驟相對復(fù)雜 | 需專業(yè)設(shè)備與技術(shù) | 需特定設(shè)備與操作 |
分離時間 | 較短 | 中等 | 較長 | 中等 |
成本 | 適中 | 較低 | 設(shè)備昂貴,成本高 | 磁珠成本較高 |
適用場景 | 常規(guī)實驗 | 對純度要求不高的實驗 | 高純度特殊需求實驗 | 特定細(xì)胞亞群分離 |
免疫學(xué)研究:在免疫學(xué)研究中,,淋巴細(xì)胞是核心研究對象 。FICOLL PAQUE PLUS 分離得到的高純度,、高活力淋巴細(xì)胞,,可用于研究淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答機(jī)制,如 T 細(xì)胞和 B 細(xì)胞的活化、增殖,、分化過程,,以及它們在免疫防御、免疫調(diào)節(jié)中的作用,。通過對淋巴細(xì)胞的深入研究,,有助于揭示免疫系統(tǒng)的工作原理,為開發(fā)新型免疫治療方法,、疫苗等提供理論基礎(chǔ),。例如,在腫瘤免疫治療研究中,,分離出的淋巴細(xì)胞可用于體外擴(kuò)增和修飾,,使其具備更強(qiáng)的抗腫瘤活性,再回輸?shù)交颊唧w內(nèi),,以達(dá)到治療腫瘤的目的,。
傳染病研究:在傳染病研究領(lǐng)域,,淋巴細(xì)胞在機(jī)體對抗病原體感染的過程中發(fā)揮著重要作用 ,。利用 FICOLL PAQUE PLUS 分離患者外周血中的淋巴細(xì)胞,可用于研究淋巴細(xì)胞對病原體的免疫反應(yīng),,包括淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的類型和水平,、淋巴細(xì)胞對病原體的殺傷能力等。這有助于深入了解傳染病的發(fā)病機(jī)制,,為開發(fā)針對性的治療藥物和疫苗提供關(guān)鍵線索,。例如,在艾滋病研究中,,通過對 HIV 感染者淋巴細(xì)胞的研究,,可探索 HIV 病毒如何感染淋巴細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞如何抵抗病毒感染,為尋找有效的艾滋病治療方法提供方向,。
血液學(xué)研究:在血液學(xué)研究中,,淋巴細(xì)胞的數(shù)量和功能變化與多種血液疾病密切相關(guān) 。FICOLL PAQUE PLUS 可用于從患者血液樣本中分離淋巴細(xì)胞,,用于分析淋巴細(xì)胞在白血病,、淋巴瘤等血液腫瘤中的異常表現(xiàn),如細(xì)胞形態(tài),、免疫表型,、基因表達(dá)等方面的變化。通過對這些異常的研究,,有助于血液疾病的診斷、分型和預(yù)后評估,同時也為開發(fā)新的治療策略提供依據(jù),。例如,,在白血病的診斷和治療監(jiān)測中,準(zhǔn)確分離和分析淋巴細(xì)胞的變化,,對于判斷病情進(jìn)展和治療效果具有重要意義,。
樣本準(zhǔn)備:使用 FICOLL PAQUE PLUS 時,建議使用新鮮采集的人外周血樣本 ,。采血過程應(yīng)嚴(yán)格遵循無菌操作原則,,使用無熱原、無內(nèi)毒素的采血器材,。采集后的血液樣本若不能立即進(jìn)行分離,,可在室溫下短暫保存,但不宜超過數(shù)小時,,以免影響細(xì)胞活性和分離效果,。若需長時間保存,可采用適當(dāng)?shù)目鼓齽┨幚砗?,在低溫下保存,,但?yīng)注意保存條件對細(xì)胞的影響。
實驗操作流程:操作時,,先將 FICOLL PAQUE PLUS 分離液小心轉(zhuǎn)移至離心管中,,注意不要產(chǎn)生氣泡 。然后用移液器將稀釋后的血液樣本緩慢鋪加在分離液上方,,形成清晰的界面,。血液與分離液的體積比推薦為 2:3 。將離心管放入離心機(jī)中,,按照推薦的離心條件(如室溫下,,以特定轉(zhuǎn)速離心一定時間,具體參數(shù)可參考產(chǎn)品說明書)進(jìn)行離心,。離心結(jié)束后,,可觀察到明顯的細(xì)胞分層,位于分離液界面上的白膜層即為富含淋巴細(xì)胞的單個核細(xì)胞層,。使用移液器小心吸取該層細(xì)胞,,轉(zhuǎn)移至新的離心管中,再通過適當(dāng)?shù)南礈觳襟E去除殘留的分離液和雜質(zhì),,即可獲得相對純凈的淋巴細(xì)胞,。
存儲條件:為保證 FICOLL PAQUE PLUS 的性能,應(yīng)將其存儲于 4 - 30℃的環(huán)境中 ,。避免陽光直射和高溫環(huán)境,,防止產(chǎn)品變質(zhì),。在使用過程中,要注意產(chǎn)品的有效期,,盡量在有效期內(nèi)使用,,以確保實驗結(jié)果的可靠性。開封后的產(chǎn)品應(yīng)盡快使用,,并妥善保存剩余部分,,防止微生物污染。若發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品出現(xiàn)渾濁,、沉淀或顏色異常等情況,,請勿使用。
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