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光學性能：聚合物蓋玻片底部或玻璃底部,，均具有高光學質量,。聚合物蓋玻片底部的折射率（nd 589nm）為 1.52，阿貝數(shù) 56,，厚度 180μm（#1.5）,，在高分辨率顯微鏡下能提供清晰圖像，且自發(fā)熒光低,，對細胞成像干擾極小 ,。玻璃底部（如用于特定應用的 1.5h 玻璃蓋玻片，厚度 170μm±5μm）同樣具備出色光學性能,，適用于全內反射熒光（TIRF）,、單分子及超分辨率顯微鏡等成像技術 。
理想細胞生長環(huán)境：經(jīng) ibiTreat 處理的表面為細胞提供了良好的粘附與生長條件,，多數(shù)貼壁細胞無需額外包被即可在此表面良好生長 ,。對于有特殊需求的細胞培養(yǎng)，還可進行細胞外基質（ECM）蛋白包被,。而未處理的疏水表面,，可用于需特定包被的貼壁細胞培養(yǎng)；bioinert 表面則阻止細胞粘附,，適合懸浮細胞,、細胞聚集體、球體及類器官培養(yǎng) ,。
減少蒸發(fā)設計：培養(yǎng)皿蓋子設有鎖扣位置,，能有效減少液體蒸發(fā)，為在非加濕環(huán)境下的長期細胞培養(yǎng)與研究提供穩(wěn)定條件,。同時,，培養(yǎng)皿采用透氣塑料材質，確保細胞培養(yǎng)過程中二氧化碳和氧氣等氣體的正常交換 ,。
操作便捷與通用性：標準 35mm 直徑規(guī)格,，方便操作與適配各類實驗室設備 ,。高壁設計不僅增加了培養(yǎng)容積（2ml），還便于日常使用時的拿取與操作 ,。此外,，該培養(yǎng)皿與所有染色和固定溶劑兼容，可滿足多種細胞實驗需求,。
細胞培養(yǎng)與成像：適用于各類細胞系的培養(yǎng),，以及原代細胞培養(yǎng) 。結合其高分辨率成像能力,，可用于免疫熒光染色后細胞的寬場和共聚焦熒光顯微鏡觀察,，也適合活細胞的長時間成像研究，實時監(jiān)測細胞生長,、增殖,、分化等動態(tài)過程 。
轉染實驗：為細胞轉染提供穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境,，可通過后續(xù)成像或分析技術,，評估轉染效率與轉染后細胞的功能變化 。
細胞定位與計數(shù)：帶有 500µm 網(wǎng)格（如 µ-Dish 35 mm, high grid - 500）的版本,，便于對細胞或細胞簇進行定位,，在計算轉染效率、統(tǒng)計特定區(qū)域內細胞事件數(shù)量等實驗中發(fā)揮重要作用 ,。
特殊顯微鏡應用：使用特殊 DIC 蓋子,，可用于微分干涉相差（DIC）顯微鏡觀察 。玻璃底部的培養(yǎng)皿版本,，特別適用于 TIRF,、單分子應用以及超分辨率顯微鏡（如 STED、SIM,、(F) PALM,、(D) STORM）和熒光相關光譜（FCS）等顯微鏡技術 。
培養(yǎng)皿檢查：收到培養(yǎng)皿后,，檢查包裝是否完好,，單個培養(yǎng)皿有無破損、污染跡象 ,。確認產(chǎn)品規(guī)格,、表面處理類型（如 ibiTreat、uncoated,、bioinert 等）是否與實驗需求相符 ,。
試劑與耗材準備：
細胞培養(yǎng)基：根據(jù)所培養(yǎng)細胞類型，選擇合適的培養(yǎng)基,，并添加相應的血清,、抗生素、生長因子等成分 ,。培養(yǎng)基需提前過濾除菌,，確保無菌狀態(tài) 。
細胞：復蘇凍存細胞或從培養(yǎng)瓶中消化獲取對數(shù)生長期細胞,，制成細胞懸液 ,。通過細胞計數(shù)確定合適的接種密度。
其他耗材：準備無菌移液器吸頭,、移液管,、離心管、鑷子等耗材,，所有耗材需保證無菌 ,。若需對培養(yǎng)皿進行額外包被（如使用 ECM 蛋白包被未處理表面的培養(yǎng)皿），準備相應包被試劑 ,。
ibiTreat 表面培養(yǎng)皿：對于需在 ibiTreat 表面培養(yǎng)的細胞,，直接將適量細胞懸液加入培養(yǎng)皿中 。例如,，若細胞接種密度為每平方厘米 1×10?個細胞,，對于生長面積 3.5cm2 的 µ-Dish 35 mm 高壁培養(yǎng)皿，可加入含有 3.5×10?個細胞的細胞懸液 ,。輕輕晃動培養(yǎng)皿,，使細胞均勻分布，避免產(chǎn)生氣泡,，然后將培養(yǎng)皿放入 37℃,、5% CO?的細胞培養(yǎng)箱中孵育 。
未處理表面培養(yǎng)皿（若需包被）：若使用未處理的疏水表面培養(yǎng)皿且需進行 ECM 蛋白包被,，先將包被試劑（如多聚賴氨酸,、纖連蛋白等）稀釋至合適濃度 。取適量稀釋后的包被試劑加入培養(yǎng)皿,，確保液體均勻覆蓋底部表面,，室溫孵育 1-2 小時或按照試劑說明書要求的時間孵育 。孵育結束后,，用無菌 PBS 沖洗培養(yǎng)皿 2-3 次,，去除未結合的包被試劑，然后進行細胞接種,，接種方法同 ibiTreat 表面培養(yǎng)皿 ,。
bioinert 表面培養(yǎng)皿：對于培養(yǎng)懸浮細胞、球體或類器官的 bioinert 表面培養(yǎng)皿,，直接將細胞懸液或含有細胞聚集體的溶液加入培養(yǎng)皿 ,。同樣輕輕晃動使分布均勻后放入培養(yǎng)箱 ,。由于細胞不會粘附在 bioinert 表面，在操作和觀察過程中需注意避免溶液過度晃動導致細胞聚集體位置改變 ,。
日常培養(yǎng)：將接種細胞后的培養(yǎng)皿放入細胞培養(yǎng)箱,，定期觀察細胞生長狀態(tài) 。根據(jù)細胞生長速度,，每隔 1-2 天更換一次培養(yǎng)基,，去除細胞代謝產(chǎn)物，補充營養(yǎng)物質 ,。觀察細胞時,，可在倒置顯微鏡下直接觀察培養(yǎng)皿中的細胞，注意細胞形態(tài),、密度變化等 ,。
顯微鏡成像：
熒光顯微鏡成像：若進行熒光染色實驗，當細胞生長至合適階段,，按照免疫熒光染色流程進行操作 ,。包括固定細胞（如使用 4% 多聚甲醛固定 15-20 分鐘）、通透處理（0.1% Triton X-100 處理 10 分鐘）,、封閉（5% BSA 封閉 30 分鐘）,、一抗和二抗孵育等步驟 。染色完成后,，用 PBS 清洗干凈,，直接在熒光顯微鏡下觀察 。由于 ibidi µ-Dish 35 mm 高壁培養(yǎng)皿底部的低自發(fā)熒光特性,，可獲得清晰的熒光圖像 ,。
其他顯微鏡成像：如需進行 TIRF、DIC 等特殊顯微鏡成像,，根據(jù)相應顯微鏡的要求,，將培養(yǎng)皿放置在配套的載物臺上 。對于需使用特殊蓋子（如 DIC 蓋子）的實驗,，在成像前更換為相應蓋子 ,。調整顯微鏡參數(shù)，獲取高質量的細胞圖像 ,。
廢棄物處理：實驗結束后,，含有細胞的培養(yǎng)基、一次性耗材等廢棄物,，按照生物安全廢棄物處理規(guī)范進行處理 ,。對于可能含原體或危險生物材料的廢棄物，需先進行高壓滅菌或化學消毒處理，然后丟棄 ,。
培養(yǎng)皿處理：若培養(yǎng)皿為一次性使用產(chǎn)品,，直接丟棄至相應廢棄物容器 。若培養(yǎng)皿可重復使用（但需確認產(chǎn)品說明是否支持）,，先將培養(yǎng)皿中的液體倒出,，用清水沖洗干凈，然后浸泡在合適的清潔劑溶液中,，超聲清洗去除殘留細胞和雜質 。清洗后用蒸餾水沖洗多次,，烘干備用 ,。但需注意，重復使用可能會影響培養(yǎng)皿的性能,，尤其是底部的光學性能和表面特性,，對于對實驗精度要求的實驗，建議使用新的培養(yǎng)皿 ,。
培養(yǎng)皿儲存：未使用的培養(yǎng)皿應儲存在干燥,、清潔的環(huán)境中，避免陽光直射和高溫 ,。對于已開封但未使用完的培養(yǎng)皿,，需密封保存，防止灰塵和微生物污染 ,。
操作過程無菌要求：在整個細胞培養(yǎng)和實驗操作過程中,，嚴格遵守無菌操作規(guī)范 。在超凈工作臺中進行操作,，使用前用 75% 酒精擦拭臺面和雙手,，對使用的耗材、試劑等進行表面消毒 ,。避免交叉污染,，不同細胞系或實驗的操作應分開進行，使用不同的移液器和耗材 ,。
蓋子鎖扣使用：當需要減少液體蒸發(fā)時（如在非加濕的顯微鏡載物臺上進行長時間成像實驗）,，使用蓋子的鎖扣功能 。但在細胞培養(yǎng)箱內正常培養(yǎng)時,，無需一直使用鎖扣,，以免影響氣體交換 。
避免底部刮擦：在操作培養(yǎng)皿過程中,，注意避免尖銳物品刮擦底部,，尤其是用于高分辨率成像的聚合物蓋玻片底部或玻璃底部，刮擦可能會導致底部光學性能下降,，影響成像質量 ,。拿取培養(yǎng)皿時,，應手持培養(yǎng)皿側壁，避免接觸底部 ,。
特殊表面使用注意：對于 bioinert 表面的培養(yǎng)皿,，由于其阻止細胞粘附的特性，在加入細胞懸液后,，盡量減少培養(yǎng)皿的移動和晃動,，以免細胞聚集體分散 。同時,，該表面不能進行額外的蛋白包被等處理,，需嚴格按照其適用范圍使用 。
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