不同類型的指示劑在SDS-PAGE電泳中的遷移情況有何差異?
SDS - PAGE 電泳中常用的指示劑有溴酚藍,、二甲苯青 FF 和銀染指示劑等,,它們的分子大小,、電荷性質不同,,在電泳中的遷移情況也存在差異,以下是具體介紹:
溴酚藍
遷移速度:溴酚藍的分子量較小,,在 SDS - PAGE 電泳中遷移速度較快,。通常在 10% - 12% 的聚丙烯酰胺凝膠中,它的遷移位置大致相當于 3 - 5 kDa 的蛋白質,。
顏色變化:溴酚藍在堿性條件下呈藍色,,在酸性條件下呈黃色。在電泳過程中,,由于凝膠環(huán)境通常為堿性,,所以它一直保持藍色,便于觀察電泳的進程,。
二甲苯青 FF
遷移速度:二甲苯青 FF 的分子量比溴酚藍大,,遷移速度較慢。在相同濃度的聚丙烯酰胺凝膠中,,它的遷移位置大約相當于 40 - 50 kDa 的蛋白質,。
顏色變化:二甲苯青 FF 通常呈現(xiàn)藍色,在電泳過程中顏色相對穩(wěn)定,,也是通過其在凝膠中的位置來指示電泳的進度,。
銀染指示劑
遷移速度:銀染指示劑并非傳統(tǒng)意義上在電泳過程中實時觀察的指示劑,而是用于在銀染步驟中幫助判斷染色和脫色程度,。它一般與蛋白質樣品一起電泳,,但在電泳過程中其遷移情況并不作為實時監(jiān)測指標。
顏色變化:在銀染過程中,,銀染指示劑會與銀離子發(fā)生反應,,通常會先于蛋白質條帶顯色,幫助實驗者判斷染色時間,。在脫色過程中,,它也會先于蛋白質條帶褪色,,可作為脫色終止的參考,其顏色變化從深色(如棕色或黑色)逐漸變?yōu)闊o色,。