GIBCO C11885500BT DMEM低糖培養(yǎng)基（含酚紅）用戶(hù)指南：細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)方案

一,、產(chǎn)品核心特性與成分解析

1. 技術(shù)優(yōu)勢(shì)與基礎(chǔ)成分

• 低糖設(shè)計(jì)：葡萄糖濃度1000 mg/L（1 g/L），適用于干細(xì)胞,、神經(jīng)元等低代謝需求細(xì)胞,，可減少細(xì)胞分化風(fēng)險(xiǎn)，維持未分化狀態(tài),；

• 核心成分：

• 氨基酸與維生素：含量為MEM培養(yǎng)基的4倍,，支持細(xì)胞長(zhǎng)期增殖；

• 酚紅指示劑：pH 7.0-7.4時(shí)呈紅色,，pH＞7.6時(shí)變紫,，pH＜6.8時(shí)變黃，便于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)培養(yǎng)環(huán)境,；

• L-谷氨酰胺：初始濃度0.584 g/L（3.7 mM）,，但易分解，需定期補(bǔ)充,；

• 丙酮酸鈉：0.11 g/L（1 mM）,，替代部分谷氨酰胺功能，減少氨積累毒性,；

• 無(wú)機(jī)鹽體系：含NaHCO?（3.7 g/L）,，需5%-10% CO?環(huán)境維持pH穩(wěn)定。

2. 適用細(xì)胞類(lèi)型與實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景

• 干細(xì)胞培養(yǎng)：低糖環(huán)境可抑制間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）向成骨/成脂分化,，維持多能性,；

• 神經(jīng)元與膠質(zhì)細(xì)胞：適用于原代神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞及PC-12等神經(jīng)細(xì)胞系,，減少糖毒性,；

• 腫瘤細(xì)胞系：HeLa、293T,、Cos-7等細(xì)胞在低糖條件下仍可維持高增殖率,；

• 代謝研究：結(jié)合Seahorse分析儀檢測(cè)細(xì)胞糖酵解與氧化磷酸化水平。

二,、操作規(guī)范與實(shí)驗(yàn)流程

1. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

• 試劑配制：

• 液體培養(yǎng)基：4℃避光保存,，有效期12個(gè)月，開(kāi)封后需2周內(nèi)用完；

• 干粉培養(yǎng)基（貨號(hào)31600034）：10×1L規(guī)格,，按說(shuō)明書(shū)溶解后過(guò)濾除菌,，分裝-20℃保存；

• 谷氨酰胺補(bǔ)充：若細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,，可添加2 mM終濃度的L-谷氨酰胺（Gibco 25030-081）。

• 儀器校準(zhǔn)：

• CO?培養(yǎng)箱：設(shè)定5% CO?,、37℃,、濕度95%；

• pH計(jì)：校準(zhǔn)至pH 7.0-7.4范圍,，檢測(cè)培養(yǎng)基初始pH,；

• 顯微鏡：每日觀察細(xì)胞形態(tài)與密度。

2. 操作流程

• 細(xì)胞復(fù)蘇：

1. 從液氮中取出凍存管,，37℃水浴快速解凍,；

2. 1000 rpm離心5分鐘，棄上清,，用含10% FBS（Gibco 16000-044）的DMEM低糖培養(yǎng)基重懸,；

3. 接種至T25培養(yǎng)瓶，37℃,、5% CO?培養(yǎng)箱中靜置,。

• 細(xì)胞傳代：

1. 待細(xì)胞密度達(dá)80%-90%時(shí)，棄舊培養(yǎng)基,，PBS（Gibco 10010-023）清洗1次,；

2. 加入0.25%胰酶（含0.02% EDTA，Gibco 25200-056）,，37℃消化1-3分鐘,；

3. 終止消化后，1000 rpm離心5分鐘,，棄上清,，用新鮮培養(yǎng)基重懸，按1:3比例傳代,。

• 凍存：

1. 消化收集細(xì)胞后,，用含10% DMSO（Sigma D2650）與90% FBS的凍存液重懸；

2. 分裝至凍存管,，-80℃過(guò)夜,，次日轉(zhuǎn)移至液氮罐長(zhǎng)期保存。

3. 實(shí)驗(yàn)后處理

• 廢棄物處理：

• 含細(xì)胞的培養(yǎng)基與胰酶需121℃高壓滅菌30分鐘,，再按生物危害品處理,；

• 一次性耗材（如移液管、培養(yǎng)瓶）需消毒后丟棄。

• 儀器維護(hù)：

• CO?培養(yǎng)箱每月清潔,，更換水盤(pán)無(wú)菌水,；

• 超凈臺(tái)使用后70%乙醇擦拭，紫外照射30分鐘,。

三,、常見(jiàn)問(wèn)題解答

Q1：培養(yǎng)基顏色變紫或變黃如何處理？
A：

1. 變紫（pH＞7.6）：

• 檢查CO?濃度是否不足（需≥5%）,；

• 添加HEPES緩沖液（終濃度10-25 mM,，Gibco 15630-080）并擰緊瓶蓋；

2. 變黃（pH＜6.8）：

• 檢查培養(yǎng)箱是否漏氣或CO?濃度過(guò)高,；

• 用1N NaOH調(diào)節(jié)pH至7.2-7.4,，過(guò)濾除菌后使用。

Q2：細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢或死亡怎么辦,？
A：

1. 檢測(cè)培養(yǎng)基有效期：液體培養(yǎng)基開(kāi)封＞2周需更換,；

2. 檢測(cè)支原體污染：使用PCR法或Hoechst染色法檢測(cè)；

3. 補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)成分：添加ITS（胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒,，Gibco 41400-045）或非必需氨基酸（NEAA,，Gibco 11140-050）。

Q3：如何延長(zhǎng)干粉培養(yǎng)基保存期,？
A：

1. 分裝保存：將10×1L干粉分裝至50 mL離心管,，-20℃冷凍；

2. 避免反復(fù)凍融：分裝后單次使用量不超過(guò)50 g,；

3. 濕度控制：開(kāi)封后密封保存于干燥器中,，添加干燥劑。

四,、總結(jié)與推薦

GIBCO C11885500BT DMEM低糖培養(yǎng)基憑借其低糖配方,、高氨基酸濃度與酚紅指示系統(tǒng)，已成為干細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞及代謝研究領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)工具,。建議科研人員：

1. 標(biāo)準(zhǔn)化操作：建立SOP文件，規(guī)范培養(yǎng)基配制,、傳代密度與凍存流程,；

2. 結(jié)合多技術(shù)平臺(tái)：與Seahorse代謝分析儀、流式細(xì)胞儀聯(lián)用,，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞功能與表型同步檢測(cè),；

3. 定期驗(yàn)證性能：每季度使用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系（如HeLa）檢測(cè)培養(yǎng)基支持細(xì)胞增殖的能力，確保實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性,。