Bio-Rad 1704467 Mini-Sub-Cell GT 水平電泳槽用戶指南：科研級核酸與蛋白質(zhì)分離技術(shù)方案

一,、產(chǎn)品核心特性與工作原理

1. 技術(shù)參數(shù)與核心設(shè)計

• 凝膠兼容性：支持7×7 cm與7×10 cm雙尺寸凝膠盤，通過更換托盤實現(xiàn)快速切換，滿足高通量（15孔梳）與高分辨率（8孔梳）實驗需求,；

• 電壓與電流范圍：工作電壓10-300 V，電流0.01-1.0 A，支持150 V快速分離（如λDNA EcoRI/HindIII酶切產(chǎn)物,，1.5小時完成）與60 V精細(xì)分離（如RNA完整性檢測）；

• 散熱與溫控：底部蜂窩狀散熱結(jié)構(gòu)結(jié)合高導(dǎo)熱材料,，長時間電泳（如SDS-PAGE）時溫度波動＜1℃,，避免樣品降解；

• 安全設(shè)計：雙層絕緣外殼,、漏電保護(hù)開關(guān)及防觸電警示標(biāo)識,，符合UL/CE安全標(biāo)準(zhǔn)。

2. 模塊化組件與擴(kuò)展性

• 電極系統(tǒng)：QuickSnap™一鍵拆卸電極,，兼容Bio-Rad PowerPac Basic/HC電源,，支持電壓斜坡啟動（0-300 V/分鐘）；

• 梳子配置：標(biāo)配8孔（1.5 mm厚）與15孔（1.0 mm厚）梳子,，可選配可調(diào)高度梳子（貨號170-4332）,，適配不同樣品量（0.5-50 μL）；

• 反向兼容性：可復(fù)用舊型號配件（如凝膠盤,、電極）,，降低實驗成本。

二,、典型應(yīng)用場景與實驗方案

1. 核酸分子分離與分析

• DNA片段分離：

• 實驗設(shè)計：使用7×10 cm凝膠盤,，15孔梳子加載1 μg λDNA EcoRI/HindIII酶切產(chǎn)物，1×TAE緩沖液,，150 V電泳60分鐘,；

• 結(jié)果示例：清晰分離19.3 kb、7.7 kb,、6.6 kb等標(biāo)準(zhǔn)片段,，條帶遷移距離與預(yù)期一致，背景信號＜5%（SYBR Safe染色）,；

• 數(shù)據(jù)驗證：與Agilent 2100生物分析儀檢測結(jié)果對比,，

• RNA完整性檢測：

• 實驗設(shè)計：7×7 cm凝膠盤,，8孔梳子加載1 μg總RNA，1×MOPS緩沖液,，60 V電泳90分鐘,；

• 結(jié)果判定：28S/18S rRNA條帶亮度比≥1.8，無降解拖尾,，背景熒光值＜100 MFI（UV透照）,；

• 應(yīng)用案例：在mRNA疫苗研發(fā)中，通過該電泳槽驗證體外轉(zhuǎn)錄RNA的完整性,，確保后續(xù)轉(zhuǎn)染效率＞90%,。

2. 蛋白質(zhì)電泳與Western Blot前處理

• SDS-PAGE：

• 實驗設(shè)計：7×10 cm凝膠盤，15孔梳子加載20 μg細(xì)胞裂解液,，1×Tris-Glycine緩沖液,，120 V電泳75分鐘；

• 結(jié)果示例：成功分離分子量范圍10-250 kDa的蛋白條帶,，Marker條帶清晰（Precision Plus Protein™ Dual Color）,，背景值＜8%（考馬斯亮藍(lán)染色）；

• 轉(zhuǎn)膜效率：搭配Bio-Rad Trans-Blot® Turbo™轉(zhuǎn)印系統(tǒng),，轉(zhuǎn)膜效率＞95%（麗春紅S預(yù)染驗證）,。

• Native-PAGE：

• 實驗設(shè)計：7×7 cm凝膠盤，8孔梳子加載50 μg線粒體蛋白,，1×NativePAGE™緩沖液,，80 V電泳120分鐘；

• 結(jié)果示例：分離復(fù)合體I（980 kDa）與復(fù)合體IV（200 kDa）,，條帶分辨率達(dá)0.5 kDa,，背景信號＜3%（銀染）。

3. 臨床診斷與病原體檢測

• 病毒核酸分離：

• 實驗設(shè)計：7×10 cm凝膠盤,，15孔梳子加載PCR擴(kuò)增產(chǎn)物（SARS-CoV-2 N基因片段）,，1×TBE緩沖液，100 V電泳45分鐘,；

• 結(jié)果判定：特異性條帶（127 bp）清晰,，與陰性對照（健康人咽拭子）無交叉反應(yīng)，靈敏度達(dá)10拷貝/反應(yīng),；

• 應(yīng)用價值：在新冠疫情期間,，該電泳槽用于驗證qPCR產(chǎn)物特異性，假陽性率＜0.1%,。

• 細(xì)菌基因突變檢測：

• 實驗設(shè)計：7×7 cm凝膠盤,，8孔梳子加載耐藥基因擴(kuò)增產(chǎn)物（如blaKPC），1×TAE緩沖液，80 V電泳60分鐘,；

• 結(jié)果示例：區(qū)分野生型（498 bp）與突變型（462 bp）條帶,，分辨率達(dá)1 bp，與測序結(jié)果符合率100%,。

三,、操作規(guī)范與注意事項

1. 實驗前準(zhǔn)備

• 凝膠制備：

• 推薦使用Bio-Rad ReadyAgarose™預(yù)制膠（貨號161-3107），避免灌膠氣泡,；

• 若手動灌膠,，需使用水平儀確保凝膠盤平整,，

• 緩沖液配制：

• 1×TAE：40 mM Tris-Acetate,，1 mM EDTA（pH 8.3），室溫保存,；

• 1×MOPS：20 mM MOPS,，5 mM NaOAc，1 mM EDTA（pH 7.0）,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

2. 電泳操作流程

• 樣品加載：

• 使用2-20 μL移液器，避免氣泡,；

• 推薦使用Bio-Rad Loading Dye（貨號161-0434）,，含甘油與追蹤染料（溴酚藍(lán)/二甲苯青）。

• 電泳參數(shù)：

• DNA分離：150 V,，60分鐘（7×10 cm凝膠）,；

• RNA分離：60 V，90分鐘（7×7 cm凝膠）,；

• 蛋白質(zhì)分離：120 V,，75分鐘（7×10 cm凝膠）。

3. 實驗后維護(hù)

• 清潔與消毒：

• 使用去離子水沖洗凝膠托盤,，避免使用有機溶劑,；

• 70%乙醇擦拭電極與外殼，紫外照射30分鐘滅菌,。

• 儲存條件：

• 凝膠盤與梳子4℃保存,，電極室溫干燥保存；

• 長期停用時,，拆除電極并覆蓋防塵罩,。

四、常見問題解答

Q1：如何解決電泳條帶拖尾,？
A：

1. 檢查上樣量是否超載（DNA≤500 ng/孔,，RNA≤1 μg/孔）；

2. 確認(rèn)緩沖液未重復(fù)使用超過3次,；

3. 降低電壓至100 V以下,，延長電泳時間,。

Q2：凝膠托盤漏液如何處理？
A：

1. 檢查密封條是否老化或破損,，更換密封條（貨號170-4406）,；

2. 確保凝膠托盤與底座對齊，避免側(cè)向壓力,；

3. 緩沖液液面高度不超過凝膠盤邊緣3 mm,。

Q3：如何延長電極使用壽命？
A：

1. 定期使用細(xì)砂紙打磨電極表面氧化物,；

2. 避免在緩沖液中添加高濃度SDS（≤0.1%）或尿素（≤8 M）,；

3. 電泳結(jié)束后立即拆卸電極，用去離子水沖洗,。