QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)用戶指南

摘要：本文為科研人員提供QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)的詳細用戶指南。介紹了該產(chǎn)品的基本信息,、原理、應(yīng)用場景,、操作步驟,、注意事項及性能參數(shù)，旨在幫助用戶更好地理解和使用該產(chǎn)品,，以提升實驗效率與準(zhǔn)確性,。
關(guān)鍵詞：QIAGEN 19133蛋白酶K；DNA和RNA制備,；蛋白酶消化,；用戶指南

一、引言

在分子生物學(xué)實驗中,，DNA和RNA的制備是至關(guān)重要的步驟。蛋白酶K作為一種高效的蛋白酶,，在DNA和RNA制備過程中的蛋白酶消化步驟中發(fā)揮著關(guān)鍵作用,。QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)憑借其高活性、廣泛的底物特異性和穩(wěn)定的性能,，本文將詳細介紹該產(chǎn)品的相關(guān)信息,，以幫助用戶更好地使用。

二,、產(chǎn)品概述

（一）基本信息

• 品牌：QIAGEN

• 產(chǎn)品名稱：蛋白酶K（Proteinase K）

• 貨號：19133

• 規(guī)格：10ml

• 存儲條件：2—8℃

（二）產(chǎn)品原理

QIAGEN蛋白酶K是一種從腐生真菌Tritirachium album中分離出來的枯草桿菌蛋白酶型蛋白酶,。它具有很高的比活性，能在很寬的溫度（通常在37—70℃范圍內(nèi)活性較高）和pH值（pH 4.0—12.0,，最佳pH為7.5—9.0）范圍內(nèi)保持穩(wěn)定,，且在較高溫度下活性大大提高,。可溶性鈣對于其酶活性不是必需的,，這意味著用于抑制Mg2?依賴性酶（如核酸酶）的EDTA不會抑制蛋白酶K的活性,。

三、產(chǎn)品特點

（一）高活性

在多種DNA和RNA純化流程常用的緩沖液中提供高活性,，如30 mM Tris·Cl,、30 mM EDTA、5% Tween 20,、0.5% Triton X-100,、800 mM GuHCl等緩沖液中，都能保持較高的活性,。

（二）廣泛的底物特異性

適用于多種樣本的蛋白酶消化,，包括血液、細胞培養(yǎng)基,、組織,、細菌等，能夠高效地消化樣本中的蛋白質(zhì),，為后續(xù)的DNA和RNA提取創(chuàng)造有利條件,。

（三）穩(wěn)定性好

在很寬的溫度和pH值范圍內(nèi)可保持穩(wěn)定，并且在高溫時具有更高活性,，這使得它能夠適應(yīng)不同的實驗條件和樣本類型,。

（四）不含DNase和RNase活性

避免了在消化過程中對DNA和RNA的降解，保證了后續(xù)提取的核酸的質(zhì)量,。

四,、應(yīng)用場景

（一）DNA提取

在從血液、細胞培養(yǎng)基和組織中純化DNA的過程中,，蛋白酶K能夠有效地消化樣本中的蛋白質(zhì),，使DNA得以釋放和純化。例如,，在QIAGEN Genomic-tip操作流程中使用的Buffer G2（30 mM Tris·Cl,；30 mM EDTA；5% Tween 20,；0.5% Triton X-100,；800 mM GuHCl）中，蛋白酶K表現(xiàn)出較高的活性,，有助于從復(fù)雜樣本中高效提取DNA,。

（二）RNA提取

在RNA提取過程中，蛋白酶K同樣能夠消化蛋白質(zhì),，減少RNA的降解,，提高RNA的純度和產(chǎn)量,。

（三）其他應(yīng)用

除了DNA和RNA提取，蛋白酶K還可用于其他需要蛋白酶消化的實驗,，如蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的樣品處理等,。

五、操作步驟

（一）配制蛋白酶K溶液

一般配制濃度為20mg/ml蛋白酶K溶液,。例如,，可將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml dd水中，輕輕搖動,，直至蛋白酶K溶解,。不要渦旋混合，再加水定容到10ml,，最后分裝成小份貯存于-20℃,。

（三）使用方法

1. 根據(jù)終濃度50—100μg/ml，吸取適量蛋白酶K溶液,，滴到消化樣品中,。

2. 孵育：孵育溫度為55—65℃，理想孵育溫度為58℃,，孵育時間為15min至48h,，依據(jù)樣本情況而定。

3. 后續(xù)處理：孵育完成后,，按照相應(yīng)的DNA或RNA提取試劑盒的操作步驟進行后續(xù)處理,。

六、注意事項

（一）操作防護

本產(chǎn)品對人體有害,，操作時請務(wù)必穿實驗服，戴一次性手套和口罩,，避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。

（二）稀釋建議

如果需把20mg/ml的蛋白酶K再稀釋，建議使用pH7.4—7.8的10mM Tris-HCl進行稀釋,。

（三）避免同時使用

使用手動QIAamp DNA Blood Kit和QIAGEN Blood & Cell Culture DNA Kit的用戶應(yīng)該用7ml蒸餾水重懸每個瓶中的QIAGEN Protease,。使用QIAamp DNA Blood BioRobot 9604 Kit的用戶應(yīng)該用10ml蒸餾水重懸每個瓶中的QIAGEN Protease。QIAGEN蛋白酶不可與DNeasy Tissue,、DNeasy 96 Tissue及QIAamp DNA Mini Kit中的ATL緩沖液同時使用。

（四）特殊條件下的注意事項

在SDS濃度大于0.5%,、肌氨酰濃度大于1%,、或有高濃度的其他去污劑時，EDTA的濃度必須小于8mM,，這樣才能在延長的孵育時間內(nèi)達到安全活性,。

（五）儲存條件

啟用后如需反復(fù)使用，應(yīng)置于-20℃—-80℃冰箱冷凍保存,，或配制成溶液后過濾除菌并分裝保存。

七,、性能參數(shù)

（一）活性

600mAU/ml（在規(guī)定條件下,，每分鐘釋放1μmol酪氨酸所需酶量為1個活性單位）,。

（二）純度

Native PAGE電泳檢測純度≥95%,。

（三）比活性

比活性值≥30U/mg蛋白。

（四）穩(wěn)定性

在尿素和SDS中活性穩(wěn)定,，在pH4.0—12.0范圍內(nèi)均有活性,，最佳pH為7.5—9.0。

八,、結(jié)論

QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)是一種高效,、穩(wěn)定的蛋白酶,，適用于DNA和RNA制備過程中的蛋白酶消化,。通過遵循本用戶指南中的操作步驟和注意事項，科研人員可以更好地利用該產(chǎn)品,，提高實驗效率和準(zhǔn)確性,。