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——微生物培養(yǎng)基核心成分的專業(yè)解析
蛋白胨(Peptone)是一種由動物組織(如牛肉、酪蛋白)或植物蛋白(如大豆)經(jīng)酶解或酸水解制備的氮源物質(zhì),,廣泛用于微生物培養(yǎng)基的配制,。其核心功能包括:
提供氮源:為微生物生長提供氨基酸、多肽及小分子肽類,。
促進(jìn)生長:含維生素,、礦物質(zhì)等微量成分,加速菌體代謝,。
增強適應(yīng)性:不同來源的蛋白胨可優(yōu)化特定菌株的生長環(huán)境,。
類型 | 原料來源 | 適用場景 | 特點 |
---|---|---|---|
動物源蛋白胨 | 牛肉、豬骨 | 細(xì)菌,、真菌培養(yǎng)(如大腸桿菌,、酵母) | 氨基酸組成豐富,含維生素B族 |
植物源蛋白胨 | 大豆,、小麥 | 乳酸菌,、植物內(nèi)生菌培養(yǎng) | 低過敏原性,適合植物共生菌研究 |
酪蛋白胨 | 牛奶酪蛋白 | 分子生物學(xué)實驗(如質(zhì)粒轉(zhuǎn)化) | 純度高,,批次間穩(wěn)定性強 |
胰蛋白胨 | 動物胰酶水解 | 高要求微生物(如支原體,、衣原體) | 富含支鏈氨基酸,促進(jìn)細(xì)胞膜合成 |
指標(biāo) | 標(biāo)準(zhǔn)值 | 檢測方法 |
---|---|---|
總氮含量 | ≥12.0% | 凱氏定氮法 |
氨基酸含量 | ≥8.0% | 高效液相色譜法(HPLC) |
灰分 | ≤5.0% | 灼燒法 |
pH值(1%水溶液) | 6.5-7.5 | 電位滴定法 |
溶解性 | 全溶,,無沉淀 | 目視觀察 |
培養(yǎng)基配制
按配方比例稱取蛋白胨(如LB培養(yǎng)基:10 g/L蛋白胨),,加入蒸餾水?dāng)嚢枞芙狻?/p>
調(diào)節(jié)pH至目標(biāo)值(如7.0±0.2),,121℃高壓滅菌20分鐘。
無菌操作
滅菌后培養(yǎng)基需在超凈臺內(nèi)分裝,,避免二次污染,。
固體培養(yǎng)基冷卻至50-55℃時倒平板,防止冷凝水過多,。
儲存條件
未開封的蛋白胨需密封保存于干燥陰涼處,,避免吸潮結(jié)塊。
開封后建議分裝,,4℃冷藏保存,,有效期6個月。
微生物發(fā)酵:作為氮源用于抗生素(如青霉素),、氨基酸(如谷氨酸)的生產(chǎn)。
分子生物學(xué):在LB,、SOB等培養(yǎng)基中促進(jìn)質(zhì)粒擴(kuò)增和轉(zhuǎn)化效率,。
食品微生物檢測:用于沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng),。
環(huán)境科學(xué):研究土壤微生物群落對不同氮源的響應(yīng),。
微生物生長測試
在LB培養(yǎng)基中接種大腸桿菌(E. coli),,37℃培養(yǎng)12小時后,,菌落直徑應(yīng)≥2 mm。
氨基酸譜分析
使用HPLC檢測,必需氨基酸(如亮氨酸,、異亮氨酸)占比≥30%,。
無菌驗證
按《中國藥典》2020版要求,37℃培養(yǎng)7天,,無菌生長,。
原料溯源
動物源蛋白胨需確認(rèn)原料無瘋牛?。˙SE)風(fēng)險,,植物源需避免轉(zhuǎn)基因成分。
批次一致性
長期實驗建議使用同一供應(yīng)商的同一批次產(chǎn)品,,減少實驗誤差,。
替代方案
對高成本實驗,可嘗試酵母提取物(Yeast Extract)部分替代蛋白胨(比例1:1),。
Q:蛋白胨結(jié)塊是否影響使用?
A:輕微結(jié)塊可微波低火加熱溶解,,嚴(yán)重結(jié)塊需更換新批次,。
Q:如何降低培養(yǎng)基泡沫?
A:減少蛋白胨用量至8 g/L,,或添加0.1%消泡劑(如聚二甲基硅氧烷),。
Q:蛋白胨與水解酪蛋白(Casein Hydrolysate)的區(qū)別?
A:蛋白胨為多肽混合物,,水解酪蛋白為更小分子肽,,適合不同菌株需求。
推薦品牌:Oxoid,、BD Difco、青島海博生物
檢測標(biāo)準(zhǔn):符合USP,、EP,、CP藥典要求
技術(shù)支持:提供氨基酸譜分析報告及微生物生長驗證數(shù)據(jù)
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