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脂肪酸值測(cè)定方法
閱讀：4818 發(fā)布時(shí)間：2018-7-18
測(cè)定方法
滴定法
滴定法使用氫氧化鉀-乙醇溶液滴定中和提取液中的游離脂肪酸,，以酚酞變色顯示終點(diǎn),，該法簡(jiǎn)單易行，不需要特殊儀器和試劑,。該法存在的主要問(wèn)題如下：
①由于糧食游離脂肪酸是有機(jī)弱酸的混合物，其滴定終點(diǎn)突變不明顯。
②在糧食游離脂肪酸提取過(guò)程中,，一些色素進(jìn)入提取液以及提取液變混濁等增加了終點(diǎn)判斷的難度，使得個(gè)體間判斷終點(diǎn)差異增大,。
③氫氧化鉀-乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液較易吸收空氣中的C02,，因?yàn)樯傻奶妓猁}在醇中溶解度比水中小 [4] ，乙醇較易揮發(fā)也會(huì)影響標(biāo)準(zhǔn)液的濃度,。
④難以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作,，不便于大批樣品的測(cè)定,。
比色法
（1）生成反膠團(tuán)
該法將有機(jī)溶劑(異辛烷)，表面活性劑[雙一(2一乙基己基)磺基丁二酸鈉]和少量水以一定比例混合形成光學(xué)透明的穩(wěn)定反膠團(tuán)體系,，半徑以納米計(jì)的細(xì)小水滴在該體系中被有機(jī)溶劑包圍,，而表面活性劑的薄層分布于兩者之間。將酚紅溶于反膠團(tuán)pH=9的水相中,。酚紅的PK1等于7.8,，在堿性介質(zhì)中顯紅色，其水溶液于558 nm處有大吸收,。當(dāng)介質(zhì)pH下降時(shí),，酚紅的分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，分子共軛體系減小,，顏色也相應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色(弱酸或中性溶液),，大吸收出現(xiàn)在430 nm處。當(dāng)測(cè)定大米表面脂肪酸含量時(shí),，將大米試樣的異丙醇提取液加入到上述反膠團(tuán)體系,，充分混合后于560 nm比色，游離脂肪酸含量通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到,。標(biāo)準(zhǔn)曲線由0.001%～0.02%油酸異丙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液代替試樣提取液按上述方法比色得到,。該法測(cè)定結(jié)果與滴定法相比無(wú)顯著差別，但該法測(cè)定精密度高于滴定法,，可能由于大米表面脂肪酸含量低,，致使滴定法難以判斷滴定終點(diǎn)而造成誤差。由于該法靈敏度高,、測(cè)定速度快,，適合測(cè)定脂肪酸含量低的試樣及需要快速測(cè)定大批樣品的場(chǎng)合。
（2）銅皂比色
2003年Goffman等報(bào)道使用銅皂比色法測(cè)定米糠游離脂肪酸含量,。該法初由Duncombe提出 [5] ,，使用Cu(N03)·3H2O和三乙醇胺為銅試劑和顯色試劑，脂肪酸與上述試劑反應(yīng)后生成銅皂,，通過(guò)比色測(cè)定含量,。
色譜法
色譜法測(cè)定游離脂肪酸含量的報(bào)道已有許多 [6] ，但大多用于測(cè)定油料,、油脂或生物樣品中的游離脂肪酸含量,。色譜法需要標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，該法更適合測(cè)定試樣中單個(gè)脂肪酸的含量和脂肪酸組分,。
2000年Nishiba報(bào)道使用薄層色譜和火焰離子化檢測(cè)器測(cè)定大米游離脂肪酸含量,，用于研究大米儲(chǔ)藏期間脂肪酸值的變化 [7] 。該法將薄層層析操作簡(jiǎn)單和火焰離子化檢測(cè)器靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合在一起,，與滴定法相比,，該法靈敏度高,，所需試樣量少， 能敏感地檢測(cè)大米儲(chǔ)藏期間的脂肪酸變化,，同時(shí)避免肉眼判斷終點(diǎn)導(dǎo)致的主觀誤差,。但是該法的分析重現(xiàn)性基于溫度和濕度的穩(wěn)定，所以保持溫濕度穩(wěn)定及避免灰塵干擾是準(zhǔn)確測(cè)定的前提,。
滴定法
滴定法使用氫氧化鉀-乙醇溶液滴定中和提取液中的游離脂肪酸,，以酚酞變色顯示終點(diǎn),，該法簡(jiǎn)單易行，不需要特殊儀器和試劑,。該法存在的主要問(wèn)題如下：
①由于糧食游離脂肪酸是有機(jī)弱酸的混合物，其滴定終點(diǎn)突變不明顯。
②在糧食游離脂肪酸提取過(guò)程中,，一些色素進(jìn)入提取液以及提取液變混濁等增加了終點(diǎn)判斷的難度，使得個(gè)體間判斷終點(diǎn)差異增大,。
③氫氧化鉀-乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液較易吸收空氣中的C02,，因?yàn)樯傻奶妓猁}在醇中溶解度比水中小 [4] ，乙醇較易揮發(fā)也會(huì)影響標(biāo)準(zhǔn)液的濃度,。
④難以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作,，不便于大批樣品的測(cè)定,。
比色法
（1）生成反膠團(tuán)
該法將有機(jī)溶劑(異辛烷)，表面活性劑[雙一(2一乙基己基)磺基丁二酸鈉]和少量水以一定比例混合形成光學(xué)透明的穩(wěn)定反膠團(tuán)體系,，半徑以納米計(jì)的細(xì)小水滴在該體系中被有機(jī)溶劑包圍,，而表面活性劑的薄層分布于兩者之間。將酚紅溶于反膠團(tuán)pH=9的水相中,。酚紅的PK1等于7.8,，在堿性介質(zhì)中顯紅色，其水溶液于558 nm處有大吸收,。當(dāng)介質(zhì)pH下降時(shí),，酚紅的分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，分子共軛體系減小,，顏色也相應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色(弱酸或中性溶液),，大吸收出現(xiàn)在430 nm處。當(dāng)測(cè)定大米表面脂肪酸含量時(shí),，將大米試樣的異丙醇提取液加入到上述反膠團(tuán)體系,，充分混合后于560 nm比色，游離脂肪酸含量通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到,。標(biāo)準(zhǔn)曲線由0.001%～0.02%油酸異丙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液代替試樣提取液按上述方法比色得到,。該法測(cè)定結(jié)果與滴定法相比無(wú)顯著差別，但該法測(cè)定精密度高于滴定法,，可能由于大米表面脂肪酸含量低,，致使滴定法難以判斷滴定終點(diǎn)而造成誤差。由于該法靈敏度高,、測(cè)定速度快,，適合測(cè)定脂肪酸含量低的試樣及需要快速測(cè)定大批樣品的場(chǎng)合。
（2）銅皂比色
2003年Goffman等報(bào)道使用銅皂比色法測(cè)定米糠游離脂肪酸含量,。該法初由Duncombe提出 [5] ,，使用Cu(N03)·3H2O和三乙醇胺為銅試劑和顯色試劑，脂肪酸與上述試劑反應(yīng)后生成銅皂,，通過(guò)比色測(cè)定含量,。
色譜法
色譜法測(cè)定游離脂肪酸含量的報(bào)道已有許多 [6] ，但大多用于測(cè)定油料,、油脂或生物樣品中的游離脂肪酸含量,。色譜法需要標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，該法更適合測(cè)定試樣中單個(gè)脂肪酸的含量和脂肪酸組分,。
2000年Nishiba報(bào)道使用薄層色譜和火焰離子化檢測(cè)器測(cè)定大米游離脂肪酸含量,，用于研究大米儲(chǔ)藏期間脂肪酸值的變化 [7] 。該法將薄層層析操作簡(jiǎn)單和火焰離子化檢測(cè)器靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合在一起,，與滴定法相比,，該法靈敏度高,，所需試樣量少， 能敏感地檢測(cè)大米儲(chǔ)藏期間的脂肪酸變化,，同時(shí)避免肉眼判斷終點(diǎn)導(dǎo)致的主觀誤差,。但是該法的分析重現(xiàn)性基于溫度和濕度的穩(wěn)定，所以保持溫濕度穩(wěn)定及避免灰塵干擾是準(zhǔn)確測(cè)定的前提,。