液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器,、泵、樣器,、色譜柱,、檢測器、記錄儀等幾分組成,。儲液器中的動相被壓泵打入系統(tǒng),，樣品溶液經(jīng)樣器入動相，被動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi),，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程,，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)出，通過檢測器時,，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
原理
分配系數(shù)與組分、動相和固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān),，也與溫度,、壓力有關(guān)。在不同的色譜分離機制中,，K有不同的概念:吸附色譜法為吸附系數(shù),，離子交換色譜法為選擇性系數(shù) (或稱交換系數(shù))，凝膠色譜法為滲透參數(shù),。但般情況可用分配系數(shù)來表示,。
在條件(動相、固定相,、溫度和壓力等)定,，樣品濃度很低時(Cs、Cm很小)時,，K只取決于組分的性質(zhì),，而與濃度無關(guān)。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件,，在這種條件下,，得到的色譜峰為正常峰;在許多情況下，隨著濃度的增大,，K減小,，這時色譜峰為拖尾峰;而有時隨著溶質(zhì)濃度增大，K也增大,，這時色譜峰為前延峰,。因此，只有盡可能減少樣量,，使組分在柱內(nèi)濃度降低,，K恒定時，才能獲得正常峰,。
發(fā)展歷史
1960年代,，由于氣相色譜對沸點有機物分析的局限性，為了分離蛋白質(zhì),、核酸等不易氣化的大分子物質(zhì),，氣相色譜的理論和方法被重新引入經(jīng)典液相色譜。1960年代末科克蘭(Kirkland),、哈伯,、荷瓦斯(Horvath)、莆黑斯,、里普斯克等人開發(fā)了界上臺液相色譜儀,，開啟了液相色譜的時代,。液相色譜使用粒徑更細(xì)的固定相填充色譜柱，提色譜柱的塔板數(shù),，以壓驅(qū)動動相,，使得經(jīng)典液相色譜需要數(shù)日乃至數(shù)月成的分離作得以在幾個小時甚至幾十分鐘內(nèi)成,。
1971年科克蘭等人出版了《液相色譜的現(xiàn)代實踐》書,，標(biāo)志著液相色譜法 (HPLC)正式建立。在此后的時間里,，液相色譜成為常用的分離和檢測手段,，在有機化學(xué)、生物化學(xué),、學(xué),、藥物開發(fā)與檢測、化,、食品,、環(huán)境監(jiān)測、商檢和法檢等方面都有廣泛的應(yīng)用,。液相色譜同時還大的刺激了固定相材料,、檢測、數(shù)據(jù)處理以及色譜理論的發(fā)展,。
1960年代前,，使用的填充粒大于100μm，提柱效面臨著困境,，后來的研究人員便采用微粒固定相來突破著瓶頸,。
