固相萃取(Solid Phase Extraction)就是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附,，與樣品的基體和干擾化合物分離，然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附,，達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的,。固相萃取作為樣品前處理，在實(shí)驗(yàn)室中得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用,。
方法建立
固相萃取
1.選擇SPE 小柱或?yàn)V膜 應(yīng)根據(jù)待測(cè)物的理化性質(zhì)和樣品基質(zhì), 選擇對(duì)待測(cè)物有較強(qiáng)保留能力的固定相,。若待測(cè)物帶負(fù)電荷, 可用陰離子交換填料, 反之則用陽(yáng)離子交換填料。若為中性待測(cè)物, 可用反相填料萃取,。SPE 小柱或?yàn)V膜的大小與規(guī)格應(yīng)視樣品中待測(cè)物的濃度大小而定,。對(duì)于濃度較低的體內(nèi)樣品, 般應(yīng)選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。
2.活化 萃取前用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5~ 10ml 溶劑沖洗濾膜,。般可用甲醇等水
溶性有機(jī)溶劑沖洗填料, 因?yàn)榧状寄軡?rùn)濕吸附劑表面, 并滲透到非性的硅膠鍵合相中, 使硅膠更容易
被水潤(rùn)濕, 之后再加入水或緩沖液沖洗,。加樣前, 應(yīng)使SPE 填料保持濕潤(rùn), 如果填料干燥會(huì)降低樣品保留值; 而各小柱的干燥程度不, 則會(huì)影響回收率的重現(xiàn)性。
3.上樣 般可采取以下措施: (1) 用0.1mol/L 酸或堿調(diào)節(jié), 使pH<3或pH>9, 離心取上層液萃取;(2) 用甲醇,、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 以水或緩沖液稀釋后萃取;(3) 用酸或無(wú)機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 調(diào)節(jié)pH 值后萃取;(4) 聲15min后加入水,、緩沖液, 取上清液萃取。尿液樣品中的藥物濃度較, 加樣前用水或緩沖液稀釋, 時(shí)可用酸,、堿水解反應(yīng)破壞藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合, 然后萃取,。速應(yīng)控制為1ml/min, 速快不利于待測(cè)物與固定相結(jié)合。
4.淋洗 反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液, 可在清洗液中加入少量有機(jī)溶劑,、無(wú)機(jī)鹽或調(diào)節(jié)pH值,。加入小柱的清洗液應(yīng)不過(guò)個(gè)小柱的容積, 而SPE濾膜為5~10ml。
5.洗脫待測(cè)物 應(yīng)選用5~10ml離子強(qiáng)度較弱但能洗下待測(cè)物的洗脫溶劑,。若需較靈敏度, 則可將洗脫液揮干后, 再用動(dòng)相重組殘留物后樣,。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水, 可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積,、較弱的洗脫液洗下待測(cè)物,再用性較強(qiáng)的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脫物,。若待測(cè)物可電離, 可調(diào)節(jié)pH 值, 抑制樣品離子化, 以增強(qiáng)待測(cè)物在反相SPE 填料中的保留, 洗脫時(shí)調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫, 收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達(dá)到*分離效果。在洗脫過(guò)程中應(yīng)減慢速,用兩次小體積洗脫代替次大體積洗脫, 回收率更,。
