紫外分光光度計,，就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分,、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段,。紫外分光光度計可以在紫外可見光區(qū)意選擇不同波長的光,。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果,。由于各種物質(zhì)具有不同的分子 、原子和不同的分子空間結構,，其吸收光能量的情況也就不會相同,，因此，每種物質(zhì)就有其*的,、固定的吸收光譜曲線,，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的低判別或測定該物質(zhì)的含量。
作原理
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量,，相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果,。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構,，其吸收光能量的情況也就不會相同,。因此，每種物質(zhì)就有其*的,、固定的吸收光譜曲線,，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎,。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分,、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
又因為許多物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)有特征吸收峰,，所以可用紫外分光光度法對這些物質(zhì)分別行測定(定量分析和定性分析),。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。
分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎,。當入射光波長定時,，溶液的吸光度A是吸光物質(zhì)的濃度C及吸收介質(zhì)厚度l(吸收光程)的函數(shù)。
確定實驗條件，并在此條件下測得標準物質(zhì)的吸收峰以及其對應波長值(大吸收波長);再在選定的波長范圍內(nèi)(大波長值處),，分別以(不同濃度)標準溶液的吸光度和溶液濃度為橫,、縱坐標繪出化合物溶液的標準曲線得到其所對應的數(shù)學方程;接著在相同實驗條件下配制待測溶液，測得待測溶液的吸光度,，用已獲得的標準曲線方程求出待測溶液中所需測定的化合物的含量,。
校正方法
紫外分光光度計的校正方法:分光光度法的重要的個物理化學量是吸光度。為了獲得準確的研究結果,，準確測得樣品溶液的吸光度是非常重要的,。般，分析結果的不可靠性與偶然誤差和系統(tǒng)誤差有關,。偶然誤差影響測量的密度,，可通過足夠數(shù)量測量的統(tǒng)計處理來減少;系統(tǒng)誤差影響測量結果的準確度，可在大體相同實驗條件下,，用種物質(zhì)的準確測量結果,，使系統(tǒng)誤差統(tǒng)起來。而分光光度計的系統(tǒng)誤差(波長校正,、分光光度計的慢散光,、放大器的線性響應、暗電流和比色皿的光程)和操作誤差(溫度改變,、儀器讀數(shù),、操作者的改變、使用物質(zhì)的純度,、稱量和濃度,、pH)對測量吸光度的影響是可以檢查和校正的。關于操作誤差,，多數(shù)情況下,，通過嚴格按操作程序測量、儀器調(diào)零,、準確稱量等來控制或減少這種誤差的產(chǎn)生
