細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具,、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費,，而且細胞一旦離開活體開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化,。因此及時進行細胞凍存十分必要,。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃,，理論上儲存時間是無限的,。

以下是關于細胞凍存的注意事項：

1.  為保持細胞最大存活率，一般都采用慢凍存融的方法,。

2.  凍存物距液氮面越近溫度越低,。標準的低凍速度為－1℃~12℃/分鐘，當溫度下降達－25℃時,，下降速度可增至－5~－10℃/分鐘,，到－100℃時則可迅速凍入液氮中,。因此要適當掌握凍存物下降入液氮中的速度,，過快能影響細胞內水分透出，太慢則促冰晶形成,。

3.  初次凍存者在下降凍存時,，宜先用細木棒伸入罐中探測液面位置，然后需用溫度計與凍存物并行的辦法，以觀測下降凍存物的速度,、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關系,，當已掌握以上各參數和凍存技術熟練后，僅按下降時間和下降距離便可獲理想凍存效果,。

4.  各種細胞對凍存速度的要求也不一樣,；上皮細胞和成纖維細胞耐受性可能大些，骨髓干細胞－2~－3℃/分鐘合適,；胚胎細胞耐受性較小,，不宜太快?？傊谝婚_始時,，下降速度不能超過－10℃/分鐘。

5.  用什么防護劑合適和用量多大,，要依細胞而定,，初代培養(yǎng)細胞用DMSO 較好，一般細胞可用甘油,；用量以較小為好,。有人認為人皮膚上皮細胞貯存在20%-30%甘油中很好。

6.  原則上細胞在液氮中可貯存多年,，但為妥善起見,，凍存一年后，應再復蘇培養(yǎng)一次,，然后再繼續(xù)凍存,。

7. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作,，以免凍傷

8. 注意自身的安全,，對于來自人源性或病毒感染的細胞株應特別小心。操作過程中,，應避免引起氣溶膠的產生,，小心有毒性試劑例如DMSO，并避免尖銳物品傷人等,。