細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具,、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費(fèi)，而且細(xì)胞一旦離開活體開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化,。因此及時進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要。細(xì)胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細(xì)胞儲存在液氮中,，溫度達(dá)-196℃,，理論上儲存時間是無限的。

以下是關(guān)于細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng)：

1.  為保持細(xì)胞最大存活率,，一般都采用慢凍存融的方法,。

2.  凍存物距液氮面越近溫度越低。標(biāo)準(zhǔn)的低凍速度為－1℃~12℃/分鐘,，當(dāng)溫度下降達(dá)－25℃時,，下降速度可增至－5~－10℃/分鐘，到－100℃時則可迅速凍入液氮中,。因此要適當(dāng)掌握凍存物下降入液氮中的速度,，過快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促冰晶形成,。

3.  初次凍存者在下降凍存時,，宜先用細(xì)木棒伸入罐中探測液面位置,，然后需用溫度計(jì)與凍存物并行的辦法，以觀測下降凍存物的速度,、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關(guān)系,，當(dāng)已掌握以上各參數(shù)和凍存技術(shù)熟練后，僅按下降時間和下降距離便可獲理想凍存效果,。

4.  各種細(xì)胞對凍存速度的要求也不一樣,；上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞耐受性可能大些，骨髓干細(xì)胞－2~－3℃/分鐘合適,；胚胎細(xì)胞耐受性較小,，不宜太快?？傊谝婚_始時,，下降速度不能超過－10℃/分鐘。

5.  用什么防護(hù)劑合適和用量多大,，要依細(xì)胞而定,，初代培養(yǎng)細(xì)胞用DMSO 較好，一般細(xì)胞可用甘油,；用量以較小為好,。有人認(rèn)為人皮膚上皮細(xì)胞貯存在20%-30%甘油中很好。

6.  原則上細(xì)胞在液氮中可貯存多年,，但為妥善起見,，凍存一年后，應(yīng)再復(fù)蘇培養(yǎng)一次,，然后再繼續(xù)凍存,。

7. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護(hù)工作,，以免凍傷

8. 注意自身的安全,，對于來自人源性或病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心。操作過程中,，應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生，小心有毒性試劑例如DMSO,，并避免尖銳物品傷人等,。