二手LC液相色譜儀如何改善分離的選擇性,?
二手LC液相色譜儀分析中,,通過向流動相中加入改性劑調(diào)節(jié)pH值和調(diào)節(jié)流動相的溶劑極性強度,,可以改善分離的選擇性,。
一、向二手LC液相色譜儀流動相中加入改性劑調(diào)節(jié)pH值
(1)抑制溶質(zhì)離子化:
反相液相色譜中,,常向含水流動相中加入酸,、堿或緩沖溶液,使流動相的pH值控制在一定數(shù)值,,抑制溶質(zhì)離子化,,減少譜帶拖尾,改善峰形,,以提高分離選擇性,。例如在分析有機弱酸時,常向甲醇-水流動相中加入1%甲酸(或乙酸,、磷酸,、硫酸),抑制溶質(zhì)離子化,,以獲得對稱的色譜峰,。對于弱堿性樣品向流動相中加入1%三乙胺,,也可以達到同樣的效果,。
(2)調(diào)節(jié)離子強度:
反相液相色譜中,當被分析物質(zhì)是易離解的有機物時,,隨流動相pH值的增加,,鍵合相表面殘存的硅羥基和堿的陰離子的親和能力增強,會引起峰形拖尾并干擾分離,,可在流動性中加入0.1%~1%的乙酸鹽,、硫酸鹽或硼酸鹽。因為鹽效應(yīng)會減弱殘存硅羥基的干擾作用,,可抑制峰形拖尾并改善分離效果,。但經(jīng)常使用磷酸鹽或鹵化物,,會造成硅烷化固定相的降解。
通常調(diào)節(jié)pH值對中性化合物的影響不大,,但對帶有離子化基團的化合物(如氨基,、羧基和羥基等)保留因子影響可達10~30倍,分離度變化明顯,。但如果使用的流動相中加入了緩沖鹽,,要在使用前用純水過渡。如果緩沖鹽或離子對試劑濃度較低,,需要較長時間平衡,。
二、調(diào)節(jié)二手LC液相色譜儀流動相的溶劑極性強度
1,、由強到弱:
一般先用90%的乙腈或甲醇-水或緩沖溶液進行試驗,,可很快得到分離結(jié)果,然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例,。
2,、三倍規(guī)則:
每減少10%的有機溶劑(乙腈或甲醇)的量,保留因子增加約3倍,,此為三倍規(guī)則,。調(diào)整時注意觀察各個峰的分離情況。
3,、粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào):
當分離達到一定程度時,,應(yīng)將有機溶劑(乙腈或甲醇)10%的改變量調(diào)整為5%,并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率,,直至各組分的分離情況不再改變,。