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如何選擇合適的色譜柱
一,在選擇合適的色譜柱時,，需考慮的因素有很多：
（1）選擇一個固定相,，根據(jù)分析對象的選擇性,、極性和固定相分子中苯基含量進行仔細判定,；
（2）要了解色譜柱直徑如何影響柱效,、溶質(zhì)保留值,、柱頭壓和載氣流速等因素；
（3）確定多長的柱長會影響溶質(zhì)的保留值,、柱頭壓及成本,；
（4）從柱容量、惰性,、流失和溫度上限出發(fā),，正確評估薄、厚液膜色譜柱的不同,。
二,要選擇色譜柱,，首先需要確定要使用的是填充柱還是毛細管柱。
填充柱比毛細管柱具有更高的樣品容量,，雖然這一差距由于HP發(fā)明了大孔 530mm 毛細管而大大縮小,。檢測器靈敏度的改進也減少了對大劑量樣品的需要。填充柱可能具有優(yōu)勢的領(lǐng)域是氣體樣品的分析?，F(xiàn)代液相色譜中,，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇,。
三，毛細管柱
1.色譜柱材料,這種材料必須盡可能是惰性的,，尤其是對于痕量分析或容易拖尾的化合物,，例如硫醇或類似的活性化合物。對于毛細管柱,，熔融石英是可選的材料,。
有兩種類型的熔融石英毛細管柱：壁涂開管柱 (WCOT) 色譜柱和多孔層開管柱 (PLOT) 色譜柱。WCOT 色譜柱是固定相液膜涂漬在去活的色譜柱壁上,。這是氣相色譜中較常用的色譜柱,。PLOT 色譜柱中固定相是固體物質(zhì)涂漬到色譜柱壁上。
填充柱可以是玻璃或金屬,，通常是不銹鋼的,。金屬雖然比較有活性，但其對非極性物質(zhì)比較穩(wěn)定,。但是如果樣品中有極性組分需要分析,，請選擇玻璃柱。如果玻璃柱還是活性強（引起峰拖尾,、樣品丟失等）,，請進行去活處理。
2.固定相,選擇毛細管柱時,，首先需要確定是否需要 PLOT 色譜柱,。下面是 3 種 PLOT 色譜柱的典型應(yīng)用領(lǐng)域：分子篩 不揮發(fā)氣體，對水比較敏感二乙烯基苯 (DVB) — HP-PLOT Q C1 到 C3 全部異構(gòu)體的分離,，部分 C4 和更高的（直到 C14）的異構(gòu)體分離,，極性化合物，揮發(fā)性溶劑可以允許含水氧化鋁 Al2O3 C1 到 C10 異構(gòu)體的分離, 對水比較敏感.
四,填充色譜柱
1.正相色譜,正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）,，以及其他具有極性官能團,，如胺基團
(NH2,APS)和氰基團（CN，CPS）的鍵合相填料,。由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他團的極性較強,，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小,，即極性強弱的組份首先被沖洗出色譜柱,。
2.反相色譜,反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ)，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相,。
反相色譜所使用的流動相極性較強,，通常為水，緩沖液與甲醇,，已腈等混合物,。
樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合首先被沖出,，而極性弱的組份會在色譜柱上有
更強的保留。常用的反相填料有C18（ODS）,、C8（MOS）,、C4（B）、C6H5（Phenyl）等,。
3.聚合物填料,聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,，其主要優(yōu)點是在PH值為1～14均可使用。相對與硅膠基質(zhì)的C18填料,，這類填料具有更強的疏水性,；大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。現(xiàn)在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質(zhì)填料,，色譜柱柱效較低,。
4.其他無機填料,其它HPLC的無機填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì),，一般于特殊的用途,。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相,，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ),，不再需其它的表面改性，該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強,，石墨化碳可用于分離某些幾何導(dǎo)構(gòu)體，又由于HPLC流動相中不會被溶解,，這類柱可在任何PH與溫度下使用,。氧化鋁也可用于HPLC，氧化鋁微粒剛性強,，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,，其優(yōu)點是可在PH高達12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強,，應(yīng)用范圍受到一定的限制,，所以未能廣泛應(yīng)用，新型氧化鋯填料也可用于HPLC,，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,，應(yīng)用PH范圍1～14，溫度可達100℃,。由于氧化鋯填料幾年才開始研究,，加之面臨的實驗難度，其重要用途與優(yōu)勢尚在進行中,。