液質(zhì)聯(lián)用儀的驗收要求(AB三重四極桿)
靈敏度,,必須在單位質(zhì)量分辨率下
靈敏度是用信噪比來表示的,,S/N,,信噪比的計算又有峰-峰比和RMS之分(RMS計算的信噪比一般要比峰-峰比計算的高5~10倍)
RMS是在待測峰周圍,,找一段質(zhì)量范圍,,然后做均方根平均,作為噪音高度(強度),。再拿待測峰的高度除以平均高度,,即為RMS。
峰比,,是尋找待測峰周圍一個高的噪音峰,,拿待測峰的高度去比上強的那個噪音峰??赡芩幬餁埩魴z測時要求如何判定時會用到,。儀器驗收時,,不會做這事,因為即使做,,也是一針好一針壞,,每個實驗室的結(jié)果都不一樣。
質(zhì)譜的一大特色,,就是它是一個質(zhì)量檢測器,,峰面積跟質(zhì)量成正比。也就是說,,拿1 pg/uL,,進樣10 uL;跟拿5 pg/uL,,進樣2 uL相比,,如果其它條件都一樣,峰面積應(yīng)該是一樣的,。
從實驗人員來說,,稀釋樣品可能比較容易,很容易比較準確,;而進樣器的定量環(huán)一般為20 uL,,所以進樣10 uL,一定比進樣2 uL來得準確一些,。
分辨率,,必須指明在哪個具體的質(zhì)量處
1)對于磁質(zhì)譜,,我們?nèi)绻f分辨率為10000,,比常規(guī)有機質(zhì)譜10000的分辨率,要好很多很多,。
2)對于四極桿,、離子阱,分辨率用10000表示是不科學(xué)的,,因為它總在變,,所以用FWHM或R=nM表示比較好,因為它在基本m/z范圍內(nèi)是不變的,?;蛘撸f明是在哪個質(zhì)量數(shù)下測定的,,比如在500 m/z時,,分辨率優(yōu)于5000。
3)對于TOF/FT/Orbitrap等,,必須指明在哪個質(zhì)量數(shù)下面測定的,,也用10000,、20000 之類的數(shù)字來表示。
單位質(zhì)量分辨下的m/z范圍
必須是單位質(zhì)量分辨以內(nèi)的m/z范圍
1,、四極桿型
極限大約在3000~4000 amu
那么,,四極桿擅長的就是定量!
2,、離子阱型
極限大約在4000(單位質(zhì)量分辨下),,
離子阱普遍對小質(zhì)量有歧視(1/3效應(yīng)),但對大質(zhì)量(比如1000 amu以上的)反而比四極桿的響應(yīng)好,。
3,,飛行時間TOF
單獨的TOF做個十幾萬沒什么問題,但在串聯(lián)了前端的四極桿,、離子阱后,,二級質(zhì)譜(MS/MS)的m/z范圍就會受到四極桿、離子阱的限制,。
單從液質(zhì)聯(lián)用來說,,能做串聯(lián)質(zhì)譜是非常重要的,因為液質(zhì)的背景干擾比氣質(zhì)大得多,,串聯(lián)質(zhì)譜就是要去除背景,。作為前端的質(zhì)量選擇器,大部分都采用四極桿或者離子阱,。
談掃描速度
首先必須聲明,,掃描速度不是非常重要的一個指標。因為實際獲得一種譜圖,,我們考慮的是duty cycle的時間,,也就是采集一張譜圖需要多少時間。所以,,考察儀器“快”,、“慢” 的主要衡量標準,應(yīng)該是duty cycle時間,,而不是掃描速度,。
掃描速度指的是:把規(guī)定m/z范圍內(nèi)的離子一個一個“掃描”出質(zhì)量分析器的能力,表示為:amu/sec,。這僅僅指從分析器出來的一段時間,,質(zhì)量分析器不同、工作模式不同,,差別就很大,。
1、四極桿:
duty cycle時間=掃描時間+掃描之間的間隔時間
對于全掃描,,比如 掃描m/z 50~550 amu,,掃描速度1000 amu/sec,,可知道掃描時間為:500/1000=0.5秒=500 毫秒,間隔時間為幾個毫秒,,所以,,大約每秒可以采集2張全掃描譜圖。
對于SIM,,比如掃描 m/z 499.5~500.5 amu,,掃描速度1000 amu/sec,可知道掃描時間為:1/1000=0.001秒,。間隔時間就比較重要了,,為幾個毫秒,所以,,用SIM,,每秒可采集幾百張譜圖
2、TOF
TOF是快速的質(zhì)量分析器,,如果只求快,,不要求分辨率,可以快到每秒采集幾萬張全掃描譜圖,。
如果還要求高分辨率,,可以每秒采集1~20張全掃描譜圖。