液質(zhì)聯(lián)用儀的驗(yàn)收要求(AB三重四極桿)
靈敏度,,必須在單位質(zhì)量分辨率下
靈敏度是用信噪比來表示的,,S/N,,信噪比的計(jì)算又有峰-峰比和RMS之分(RMS計(jì)算的信噪比一般要比峰-峰比計(jì)算的高5~10倍)
RMS是在待測(cè)峰周圍,找一段質(zhì)量范圍,,然后做均方根平均,作為噪音高度(強(qiáng)度),。再拿待測(cè)峰的高度除以平均高度,即為RMS,。
峰比,是尋找待測(cè)峰周圍一個(gè)高的噪音峰,,拿待測(cè)峰的高度去比上強(qiáng)的那個(gè)噪音峰??赡芩幬餁埩魴z測(cè)時(shí)要求如何判定時(shí)會(huì)用到,。儀器驗(yàn)收時(shí),不會(huì)做這事,,因?yàn)榧词棺?,也是一針好一針壞,,每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果都不一樣。
質(zhì)譜的一大特色,,就是它是一個(gè)質(zhì)量檢測(cè)器,,峰面積跟質(zhì)量成正比,。也就是說,,拿1 pg/uL,,進(jìn)樣10 uL;跟拿5 pg/uL,,進(jìn)樣2 uL相比,如果其它條件都一樣,,峰面積應(yīng)該是一樣的,。
從實(shí)驗(yàn)人員來說,,稀釋樣品可能比較容易,,很容易比較準(zhǔn)確;而進(jìn)樣器的定量環(huán)一般為20 uL,,所以進(jìn)樣10 uL,,一定比進(jìn)樣2 uL來得準(zhǔn)確一些,。
分辨率,必須指明在哪個(gè)具體的質(zhì)量處
1)對(duì)于磁質(zhì)譜,,我們?nèi)绻f分辨率為10000,比常規(guī)有機(jī)質(zhì)譜10000的分辨率,,要好很多很多。
2)對(duì)于四極桿,、離子阱,,分辨率用10000表示是不科學(xué)的,因?yàn)樗傇谧?,所以用FWHM或R=nM表示比較好,,因?yàn)樗诨緈/z范圍內(nèi)是不變的,。或者,,說明是在哪個(gè)質(zhì)量數(shù)下測(cè)定的,,比如在500 m/z時(shí),分辨率優(yōu)于5000,。
3)對(duì)于TOF/FT/Orbitrap等,必須指明在哪個(gè)質(zhì)量數(shù)下面測(cè)定的,,也用10000,、20000 之類的數(shù)字來表示,。
單位質(zhì)量分辨下的m/z范圍
必須是單位質(zhì)量分辨以內(nèi)的m/z范圍
1、四極桿型
極限大約在3000~4000 amu
那么,,四極桿擅長的就是定量,!
2、離子阱型
極限大約在4000(單位質(zhì)量分辨下),,
離子阱普遍對(duì)小質(zhì)量有歧視(1/3效應(yīng)),,但對(duì)大質(zhì)量(比如1000 amu以上的)反而比四極桿的響應(yīng)好。
3,,飛行時(shí)間TOF
單獨(dú)的TOF做個(gè)十幾萬沒什么問題,,但在串聯(lián)了前端的四極桿、離子阱后,,二級(jí)質(zhì)譜(MS/MS)的m/z范圍就會(huì)受到四極桿,、離子阱的限制。
單從液質(zhì)聯(lián)用來說,,能做串聯(lián)質(zhì)譜是非常重要的,,因?yàn)橐嘿|(zhì)的背景干擾比氣質(zhì)大得多,,串聯(lián)質(zhì)譜就是要去除背景,。作為前端的質(zhì)量選擇器,,大部分都采用四極桿或者離子阱。
談掃描速度
首先必須聲明,,掃描速度不是非常重要的一個(gè)指標(biāo)。因?yàn)閷?shí)際獲得一種譜圖,,我們考慮的是duty cycle的時(shí)間,,也就是采集一張譜圖需要多少時(shí)間,。所以,,考察儀器“快”,、“慢” 的主要衡量標(biāo)準(zhǔn),應(yīng)該是duty cycle時(shí)間,,而不是掃描速度,。
掃描速度指的是:把規(guī)定m/z范圍內(nèi)的離子一個(gè)一個(gè)“掃描”出質(zhì)量分析器的能力,表示為:amu/sec,。這僅僅指從分析器出來的一段時(shí)間,,質(zhì)量分析器不同、工作模式不同,,差別就很大,。
1、四極桿:
duty cycle時(shí)間=掃描時(shí)間+掃描之間的間隔時(shí)間
對(duì)于全掃描,,比如 掃描m/z 50~550 amu,,掃描速度1000 amu/sec,可知道掃描時(shí)間為:500/1000=0.5秒=500 毫秒,,間隔時(shí)間為幾個(gè)毫秒,,所以,大約每秒可以采集2張全掃描譜圖,。
對(duì)于SIM,,比如掃描 m/z 499.5~500.5 amu,掃描速度1000 amu/sec,,可知道掃描時(shí)間為:1/1000=0.001秒,。間隔時(shí)間就比較重要了,為幾個(gè)毫秒,,所以,,用SIM,每秒可采集幾百張譜圖
2,、TOF
TOF是快速的質(zhì)量分析器,,如果只求快,不要求分辨率,,可以快到每秒采集幾萬張全掃描譜圖,。
如果還要求高分辨率,可以每秒采集1~20張全掃描譜圖,。