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Agilent安捷倫液相色譜使用問題與解決方法
Agilent安捷倫液相色譜使用問題與解決方法
1 ,、如何成為真正的液相高手
（1）,、一定要珍惜儀器廠商提供的各種培訓(xùn),，因為他們的培訓(xùn)很有針對性,，而且很專業(yè),。
（2）,、要多做，液相是一個比較復(fù)雜的系統(tǒng),，在做樣的過程中,，總會遇到各種問題，通過自己的大腦解決問題,，慢慢積累就會穴道很多東西,。其次要敢于動手，不要總擔(dān)心會把儀器弄壞，拆儀器的時候細(xì)心一點就好了,，記著各個部件的順序,，連接方式。動手次數(shù)多了,，成功的機(jī)會就多了,，也就更有信心了。
（3）,、要看一些相關(guān)理論的書籍,，要了解一些關(guān)于液相的分離原理，如何優(yōu)化色譜系統(tǒng)和峰形,，能夠自己解決一些分離的問題,。這樣才是一個液相高手。
如果只是會很熟練的使用工作站和維修儀器,，排除故障,，我覺得這只是一個操作高手，而不是一個真正的液相高手,。
2,、新裝82341 GPIB 板，如何與ChemStation 通訊?
在 LC ChemStation CD-ROM 中有安裝說明,，還包括驅(qū)動程序安裝信息,。請在 Windows® Explorer 中查看子目錄： \Manuals\Installation\LC Systems。您在此處可找到《安裝手冊》,，其中包含有關(guān)如何安裝 GPIB 板以及如何調(diào)用驅(qū)動程序的逐步操作說明,。
3、為什么進(jìn)樣后在工作站在線圖譜上看不到紅色開始線,？
ChemStation 軟件有一個“在線圖譜”窗口，在此窗口中可顯示從所連接的檢測器接收到的所有信號,。當(dāng)進(jìn)樣樣品時,，會在“在線圖譜”窗口中顯示一條豎直的紅色“開始線”。這條紅色線標(biāo)志著啟動該軟件進(jìn)行原始數(shù)據(jù)的收集,。如果不顯示這條紅色線,，則不會收集數(shù)據(jù)。 如果不顯示“開始線”,，請檢查檢測器上的遙控電纜（如果是 1050 或 1090 系列液相色譜儀的話）,。如果缺少遙控電纜，則需要進(jìn)行安裝,。如果安裝了模-數(shù)轉(zhuǎn)換箱或板 (35900 ADC),，則需要從模-數(shù)轉(zhuǎn)換設(shè)備到液相色譜儀拉一根遙控電纜。檢查所有的 CAN 電纜，確保它們都連接到 1100 系列液相色譜儀上
4,、的波長如何選擇
做一個新的方法,，關(guān)鍵是選擇好的儀器條件，更關(guān)鍵的是波長正確,。但是怎樣的波長才算是的那,，比如說我已經(jīng)作了全掃描，那么怎么去選擇波長哪,？,？？一般選擇zui大吸收波長為檢測波長,當(dāng)然也要結(jié)合自己的實際情況來中和一下如果要達(dá)到zui大檢測靈敏度,，zui大吸收波長是*選擇,。如果你使用的是DAD，那么建議你將Sample WL設(shè)定為zui大吸收波長,，Bandwidth不能低于你設(shè)定的slit的值,。默認(rèn)推薦的Bandwidth為半峰寬。如果你在一次分析中有zui大吸收波長不同的物質(zhì)需要同時檢測,，可以使用檢測器的Timetable進(jìn)行波長的切換避免選用低波長,，波長越長越容易做
5、柔性不銹鋼毛細(xì)管線外面的彩色標(biāo)記是什么意思,？
安捷倫柔性不銹鋼管線外部的彩色標(biāo)記表示管的內(nèi)徑 (ID)： 紅色 表示內(nèi)徑為 0.12mm 或 0.005 英寸,。 綠色 表示內(nèi)徑為 0.17mm 或 0.007 英寸。 藍(lán)色 表示內(nèi)徑為 0.25mm 或 0.010 英寸,。 橙色 表示內(nèi)徑為 0.50mm 或 0.020 英寸,。
6、更換活塞密封圈后,，建議采用什么磨合程序,？
注意這個程序適合于反相密封圈，但不適合于正相密封圈,。還會損壞正相密封圈,。 安裝新的密封圈后，進(jìn)行zui初的“磨合”期,。在至少 350bar 的反壓下泵入異丙醇 15-30 分鐘,。這要通過使用原來的色譜柱或陰尼管線來產(chǎn)成壓力.。 有關(guān) 1100 系列 LC 泵的密封圈磨合程序,，請參見此附件,。
7、1050和1100 系列 LC 泵的活塞密封圈和活塞的部件號是什么,？
舊部件號 新部件號 活塞密封圈 5062-8516 5063-6589 (2pk) 活塞 5062-2441 5063-6586 注意：同時使用新的活塞和密封圈時,，不再需要固定器 (01018-22706),。
8、為什么燈不亮,？
很可能是燈老化或燈壞了,。請按照下列診斷方法對檢測器進(jìn)行測試。如果需要,，則請更換燈,。 如果問題依然存在，則請致電安捷倫科技公司,。
9,、什么原因?qū)е乱合嗌V儀壓力過高？
可能的原因：
1. 排氣閥里面的 PTFE 濾蕊堵塞,。
2. 壓力上限設(shè)置太低,。
3. 壓力傳感器堵塞。
建議的措施：
1. 打開排氣閥,。如果壓力依然很高,，則更換排氣閥內(nèi)的 PTFE 濾芯。
2. 查看軟件的壓力上限設(shè)置并確保設(shè)置值適于分析,。
3. 檢查系統(tǒng)內(nèi)的堵塞部位,。（如下所述） 要檢查是否堵塞，請采用隔離系統(tǒng)的方法來排除故障： 將安裝的色譜柱,、預(yù)色譜柱和預(yù)色譜柱過濾器摘開,。
①. 如果壓力恢復(fù)到正常值，則在色譜柱的位置安裝 ZDV 接頭,。 A 如果壓力正常,，則色譜柱、預(yù)色譜柱或過濾器是產(chǎn)生問題的原因,。請進(jìn)行更換,。 B 如果壓力仍然很高，則在色譜柱的另一端查找堵塞位置（例如：通入檢測器或從其通出的管路）,。
②. 如果取出色譜柱后壓力依然很高,，則檢查從排氣閥到自動進(jìn)樣器的管路。如果壓力正常,，則使用進(jìn)樣步驟命令將自動進(jìn)樣器的進(jìn)樣閥切換到旁路狀態(tài)。 A 如果壓力正常,，則說明自動進(jìn)樣器堵塞,。請檢查針、針座,、針座毛細(xì)管和轉(zhuǎn)子密封墊,。 B 如果壓力依然很高,，則檢查從進(jìn)樣六通閥到色譜柱入口之間的管線.。
10,、用不同批號的色譜柱后如何對分析方法進(jìn)行測試并確認(rèn)可用此柱,？
首先，在色譜柱包裝盒的外面找到它的批號,。批號的字體比較小,，通常在條形碼的下面。批號通常以字母“B”開頭,，后面是 5 位阿拉伯?dāng)?shù)字,。例如，下面示例中的色譜柱批號為 B99091,。 如果找不到包裝盒,，則查看色譜柱標(biāo)簽上的序列號。要從序列號來確定批號,，請安捷倫科技公司 HPLC 色譜柱的,。他們會請公司生產(chǎn)部門來查詢批號，同時確定其它哪些批號的色譜柱可用,。 獲得所需的批號或知道您的批號后,，可使用以下步驟進(jìn)行訂購： 從安捷倫科技公司。使用特殊的部件號 899999-888, 該號碼表示此訂單是色譜柱,。 說明要訂購的色譜柱的類型,、尺寸和填料粒度大小，包括通用部件號,。指出您希望色譜柱是哪個批號,，或者哪個批號的色譜柱不能用。示例說明: 部件號 899999-888 Eclipse XDB-C18 分析色譜柱,，4.6mm x 250mm,，(963967-902) 除了批號為 B99091 和 B99079 的色譜柱 用于方法確認(rèn)目的的色譜柱
11、如何避免峰拖尾和峰分叉,？
與色譜柱相關(guān)的原因及處理方法
1 色譜柱污染; 處理方法:清洗或更換色譜柱
2 色譜柱填料有問題;處理方法:反沖色譜柱或更換柱頭過濾片
3 色譜柱中間出現(xiàn)間斷;處理方法:更換色譜柱或填充空隙
4 保護(hù)柱失效;處理方法:更換保護(hù)柱
5 樣品分布差;處理方法:改進(jìn)色譜柱進(jìn)口的設(shè)計
6 與色譜柱無關(guān)的原因：柱外體積大,、樣品過量、流動相組分（添加劑,、pH值,、緩沖液濃度）改變。
12,、什么原因?qū)е乱合嗌V出現(xiàn)神秘峰”,？
與色譜柱相關(guān)的原因：
1 色譜柱污染; 處理方法:清洗或更換色譜柱
2 保護(hù)柱失效; 處理方法:更換保護(hù)柱
3 與色譜柱無關(guān)的原因：流動相溶不純、樣品里有其他成分,、系統(tǒng)里有氣泡,、電路問題,。
13、什么原因?qū)е轮Вɡ碚撍鍞?shù)）下降,？
與色譜柱相關(guān)的原因：
1 色譜柱中間出現(xiàn)間斷;處理方法:使用類似的填料填充空隙或更換色譜柱
2 保護(hù)柱無法再用;處理方法:更換保護(hù)柱
3 其他可能的原因：柱外體積大,、進(jìn)樣的樣品量大、樣品溶劑強(qiáng)度比流動相大,、流動相的改變,。
14、改變填料孔徑大小對液相色譜分離有什么影響,？
填料孔徑越小,，允許的流動相線速度越高。*流動相線速度取決于固定相的顆粒大小,。在*線速度時,，色譜柱生成的理論塔板數(shù)zui多。對于內(nèi)徑為 4.6mm 的色譜柱,，10um 的顆粒流動相線速度為 0.75ml/min 或 5um 的顆粒流動相線速度為 1.5ml/min 時,，塔板數(shù)zui多。
15,、改變色譜柱直徑對液相色譜分析有什么影響,？
如果色譜柱直徑減半，則靈敏性增加四到五倍（假設(shè)進(jìn)樣量不變）,。例如,，等量的樣品進(jìn)樣到內(nèi)徑為 2.1mm 的色譜柱比進(jìn)樣到內(nèi)徑為 4.6mm 的色譜柱所生成的峰高 5 倍左右。 只要線性流動保持不變,，則柱效率,、理論塔板數(shù)、反壓和分析時間等參數(shù)均與色譜柱內(nèi)徑的減小無關(guān),。
16,、改變填料顆粒大小和色譜柱的長度對液相色譜分離有什么影響？
如果填料顆粒大小減半,，則理論塔板數(shù)加倍（假設(shè)柱長不變）,。如果填料顆粒大小減半，則柱壓增加為原來的四倍,。 如果柱長加倍,，則理論塔板數(shù)加倍。如果柱長加倍,，則分析時間加倍,。隨著柱長增加，柱壓也線性地增加,。 以下是一個根據(jù)上述信息選擇色譜柱的示例： 一個裝填 10um 填料的長度為 200mm 的色譜柱可生成 6000 塊理論塔板,，這是在很多情況下能提供比較適當(dāng)?shù)姆蛛x的色譜柱效率。將顆粒大小由 10um 減小到 5um,，柱長仍為 200mm,，則可生成 12000 塊理論塔板。然而,，這個色譜柱可生成相當(dāng)于原來四倍的柱壓,。通常情況下不需要生成 12000 塊塔板，因此柱長可減半至 100mm,，結(jié)果生成 6000 塊塔板,，同時分析時間也縮短一半；柱壓僅比zui初裝填 10um 填料的長度為 200mm 的色譜柱高兩倍,。
17,、能否提供一種與我使用的LC 色譜柱相同的色譜柱？
即使用同一種固定相,，不同廠商的液相色譜柱也可能具有不同的保留時間,。 雖然這里提供了一些不同廠商的色譜柱的參考數(shù)據(jù)，但這些數(shù)據(jù)在不同的色譜條件下會有所不同,。我們通常根據(jù)您的應(yīng)用情況,，向您推薦一種其它的色譜柱。在此之前,，我們需要您提供以下信息： 樣品的詳細(xì)信息（樣品的成分和要分析的成分）,； 是否可以接受液相色譜條件的改變； 能否對您的方法進(jìn)行一些調(diào)整,。 如果您不能接受分析條件和/或保留時間的改變,，則應(yīng)該繼續(xù)使用目前的色譜柱。
18,、如何選擇液相色譜保護(hù)柱,？
保護(hù)柱的作用是用來防止分析柱被一些微粒物質(zhì)堵塞,及在色譜柱上強(qiáng)吸附組分在色譜柱上吸附。為防止樣品的雜質(zhì)不進(jìn)入色譜分析柱,不出現(xiàn)不必要的峰展寬,，保護(hù)柱與分析柱的體積比應(yīng)在 1:15 至 1:25 之間,。 在理想的情況下，保護(hù)柱的填料應(yīng)與分析柱相同,，以確保得到分析柱較好的色譜圖,。盡量使保護(hù)柱與分析柱近似。在我們的目錄里,，將分析柱和與其配套的保護(hù)柱列在一起,。
19、色譜圖上出現(xiàn)鬼峰,。如何消除,？
可能的原因有：
1. 上次進(jìn)樣組分產(chǎn)生
2. 有污染
3. 有氣泡
4. 色譜柱問題
5. 保護(hù)柱失效
建議用戶:
1. 做樣品后應(yīng)保證有足夠時間沖洗色譜柱,,。有必要的話在運(yùn)行結(jié)束后使用更強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱。
2. 洗脫原色譜柱中的原有污染,。
3. 為確保系統(tǒng)中沒有氣泡,，只使用*脫氣后的溶劑。
4. 更換色譜柱,。
5. 更換保護(hù)柱,。
6. 檢查流動相純度。
7. 檢查樣品中的其他成分.
20,、我的色譜圖上的峰有拖尾現(xiàn)象,。如何改善峰形？
可能的原因：
1. 系統(tǒng)內(nèi)的死體積大
2. 樣品在色譜柱上有吸附
3. 色譜柱使用時間很長
建議用戶：
1. 盡量減少流動相管線的死體積,，確保管線接頭的連接合適減小死體積,，由于不同生產(chǎn)廠家的管線的接頭和密封墊圈有可能不一樣，盡量使用安捷倫公司的管線接頭和密封墊圈,。
2. 使用洗脫更強(qiáng)的流動相
3. 更換新色譜柱
21,、什么原因?qū)е禄€波動？
基線波動有可能與實驗室的溫度及濕度變化有關(guān)系,。需確保室溫及濕度穩(wěn)定,，將儀器從通風(fēng)櫥中取出，并將色譜柱和毛細(xì)管進(jìn)行隔熱保溫,。
22,、什么原因?qū)е禄€毛刺？
這很有可能是流動池內(nèi)有氣泡,。請先停泵來進(jìn)行確認(rèn),如果毛剌消失,，則很有可能是由于流動池內(nèi)有氣泡。需要沖洗流動池,。如果毛剌仍然存在,，則需檢查檢測器本身的電噪音有關(guān)。如果需要更多幫助,，則請致電安捷倫科技公司,。在中國，請,。
23,、如何減少基線噪音？
無規(guī)律噪音可能與污染有關(guān),。請沖洗色譜柱,，對樣品做合適的前處理以避免污染，并使用 HPLC 級別的溶劑。 連續(xù)噪音有可能由檢測器或泵造成,。要確定問題是否發(fā)生在檢測器還是在泵,，請先關(guān)泵停掉流量，監(jiān)測基線,。如果此時基線平穩(wěn),，則噪音可能與泵有關(guān)系。使用 ChemStation 在線診斷或 LC 手持控制器檢查泵方面的故障,。如果停泵后噪音繼續(xù)存在，則說明噪音與檢測器有關(guān),。首先,，請嘗試更換燈。如果問題依然存在,，則請與安捷倫科技公司,。在中國，請,。
24,、如何避免液相基線飄移？
基線向上飄移表明系統(tǒng)中有污染,。請沖洗色譜柱,，凈化樣品，然后使用新溶劑,。 向下飄移通常是由于檢測室或柱箱中的溫度波動的原因,。減小室溫變化，將儀器從通風(fēng)櫥中取出,，并將色譜柱和毛細(xì)管保溫隔熱,。向下飄移也可能由于溶劑的純度不是 HPLC 級別的溶劑而且此純度低的溶劑在紫外有吸收。
25,、如何排除流動相/流動池中的氣泡,？
避免流動相中產(chǎn)生氣泡的*方式是將流動相經(jīng)脫氣裝置進(jìn)行脫氣。如果沒有脫氣裝置,，則可以在流動相溶劑瓶中通入氦氣進(jìn)行脫氣,。也可以在檢測器的出口端加一根細(xì)管線以調(diào)節(jié)流動池中的背壓，但必須注意不要超過流動池的zui大壓力,，否則會造成流動池漏液或流動池?fù)p壞,。 如果流動池中出現(xiàn)氣泡，則先摘下色譜柱,，用一根管線直接將流動相接入檢測器的入口,。將異丙醇以較大的流速注入流動池。 直到基線上看不到尖峰為止。氣泡就應(yīng)該清除掉了,。