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穿梭箱實(shí)驗(yàn)在小鼠主動(dòng)回避學(xué)習(xí)中的作用
目前,，對(duì)于該腦區(qū)在主動(dòng)回避學(xué)習(xí)中的調(diào)節(jié)機(jī)制尚未*明確。目的：探索中腦導(dǎo)水管周?chē)屹|(zhì)氨基丁酸(y-Aminobutyricacid,，GABA)能神經(jīng)元在主動(dòng)回避學(xué)習(xí)中的調(diào)控作用,。方法：通過(guò)穿梭箱實(shí)驗(yàn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行主動(dòng)回避訓(xùn)練,；通過(guò)早期即刻基因c-fos免yi熒光染色確定小鼠PAG內(nèi)c-fos表達(dá)的變化,；利用腦立體定位注射，將攜帶有hM3Dq或hM4Di基因的重組腺相關(guān)病毒定位注射于Vgat-cre轉(zhuǎn)基因小鼠的PAG內(nèi),，待2-3周后GABA能神經(jīng)元穩(wěn)定表達(dá)hM3Dq或hM4Di,。制備300|im厚度的PAG離體腦片，進(jìn)行全細(xì)胞膜片鉗記錄,，記錄CNO對(duì)GABA能神經(jīng)元活動(dòng)的調(diào)節(jié),。應(yīng)用化學(xué)遺傳學(xué)技術(shù)，在清醒小鼠體內(nèi)特異性激活或者抑制PAG的GABA能神經(jīng)元,，觀察改變GABA能神經(jīng)元的活動(dòng)對(duì)小鼠主動(dòng)回避學(xué)習(xí)能力的影響,；結(jié)果：Vgat-ChR2-EYFP轉(zhuǎn)基因小鼠在主動(dòng)回避學(xué)習(xí)中存在延遲建立的特性；主動(dòng)回避學(xué)習(xí)中,，與正常小鼠相比,，建立遲緩的小鼠PAG內(nèi)GABA能神經(jīng)元激活的數(shù)量增多；PAG內(nèi)表達(dá)hM3Dq的GABA能神經(jīng)元被其配體**氯氮平-N-氧化物(Clozapine-N-oxide,，CNO)特異性激活,，動(dòng)作電位發(fā)放頻率增加，表達(dá)hM4Di的GABA能神經(jīng)元被CNO特異性抑制,，神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢坏陌l(fā)放頻率降低,；在主動(dòng)回避學(xué)習(xí)過(guò)程中，使用CNO特異性激活PAG的GABA能神經(jīng)元可以延緩主動(dòng)回避學(xué)習(xí)過(guò)程,，使用CNO特異性抑制PAG的GABA
能神經(jīng)元并不影響主動(dòng)回避行為的建立,。結(jié)論：Vgat-ChR2-EYFP轉(zhuǎn)基因小鼠存在主動(dòng)回避學(xué)習(xí)障礙，PAG的GABA能神經(jīng)元調(diào)節(jié)主動(dòng)回避行為的建立,，激活PAG的GABA能神經(jīng)元可以起到延緩主動(dòng)回避行為建立的作用,。