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一級(jí)菌種培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn),！
一級(jí)菌種培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)！
一,、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>
1．了解一級(jí)菌種培養(yǎng)基配制的原則,；
2．掌握一級(jí)菌種培養(yǎng)基配制的工藝流程；
3．學(xué)會(huì)一級(jí)菌種培養(yǎng)基配制的具體方法步驟,；
4．學(xué)會(huì)棉塞的制作方法和手提式高壓蒸汽鍋的使用方法,。
二、實(shí)驗(yàn)設(shè)備,、工具和材料
手提式高壓鍋,、1000～1500W電爐、感量1／10g的粗天平,、1000mL量杯,、玻璃漏斗、漏斗架各一個(gè),，8～10cm長(zhǎng)乳膠管一根,，止流夾一個(gè)，20mm×200mm試管150支左右,，鐵絲筒兩個(gè),，小刀和剪子一把，普通棉花250g,，牛皮紙,、馬鈴薯、瓊脂和葡萄糖或蔗糖適量,。
三,、實(shí)驗(yàn)步驟
(1)取適量馬鈴薯，削去皮,，挖去芽眼,。稱取200g，切成薄片或小塊,，用清水淘洗之后,，放入鍋內(nèi)，加水1200mL,，用文火煮沸20～30min,，用四層紗布過(guò)濾，取濾液1000mL，如不足加水補(bǔ)足1000mL,。
(2)稱取瓊脂20g,，洗凈剪碎，加入馬鈴薯煮出液中,，用文火加熱,，邊煮邊攪拌，直至全部瓊脂融化,，再用四層紗布過(guò)濾,，并用熱水補(bǔ)足1000mL，加入預(yù)先溶解的葡萄糖水,，攪拌之后煮2min后?；稹?/div>
(3)分裝試管,。根據(jù)要求,，用1%鹽酸或1%氫氧化鈉溶液調(diào)整酸堿度后，將培養(yǎng)基趁熱分裝在試管中,。
先在玻璃漏斗嘴上套一段長(zhǎng)8～10cm的乳膠管,，卡上止流夾，將培養(yǎng)基倒入漏斗中（其余培養(yǎng)基要置電爐上保溫）,。左手握住3～5支試管,，讓乳膠管伸入試管中部，右手拇指和食指按下止流夾,，逐一注入培養(yǎng)基,，裝入量以試管長(zhǎng)度的1/5～1／4為宜。分裝時(shí)不要讓培養(yǎng)基沾在試管口上,，若已沾上,，要用干凈紗布擦干凈。
(4)塞棉塞,。培養(yǎng)基分裝試管后,，要塞上棉塞。
制作棉塞的方法很多,，這里介紹一種常用的方法,。取適量棉片，在桌上鋪成長(zhǎng)12～15cm,，寬12cm左右的薄棉墊,，先將棉墊下部1／3向上折疊，再將上部1／3向下折疊,，然后將長(zhǎng)棉墊逆時(shí)針?lè)较蜣D(zhuǎn)90°,，讓光滑的一邊向左用右手持棉墊并用拇指按住,，左手拇指和食指向外旋卷，并將參差不齊的棉纖維纏住呈一圓柱形,。用右手按順時(shí)針?lè)较驅(qū)⒚奕M(jìn)管口內(nèi)，塞入部分為棉塞長(zhǎng)度的2/3,。
(5)捆扎試管,。塞好棉塞之后，應(yīng)將試管捆成束,，并用牛皮紙將棉塞部分包扎好,，裝進(jìn)高壓鍋內(nèi)滅菌。
(6)滅菌,。用手提式高壓蒸汽滅菌鍋滅菌,。其步驟如下。
①加水,。先向鍋內(nèi)加水,，略超過(guò)支架。
②裝鍋,。將包扎好的試管直立放在內(nèi)筒中,，不要裝得過(guò)緊、過(guò)滿,。
③關(guān)嚴(yán)鍋蓋,。先將軟管對(duì)好內(nèi)筒插孔，蓋嚴(yán)鍋蓋,，對(duì)角旋緊旋鈕,。
④加熱。插上電爐插頭或推上電閘加熱,。
⑤排放冷空氣,。開始加熱時(shí)將放氣閥打開，待看到有大量蒸汽排出后關(guān)上放氣閥,。
⑥升壓保壓,。排放冷空氣之后，繼續(xù)加熱,，當(dāng)壓力表指針達(dá)到0.11MPa時(shí),，開始計(jì)時(shí)，維持30min,。
⑦降壓排氣,。維持30min之后，拔下電源插頭或拉開電閘,，使其自然冷卻,，或從電爐上把鍋提下來(lái),，待壓力表指針降到零時(shí)，打開放氣閥,，排放蒸汽,。
⑧出鍋。排完氣后,，松開旋鈕,，將鍋蓋揭開一小縫，待培養(yǎng)基溫度降至60℃左右時(shí),，取出試管,。
⑨擺斜面。試管從鍋內(nèi)取出后,，要將試管一支一支地散放在桌面上的小木條上,，使之冷卻成斜面。斜面長(zhǎng)度為試管長(zhǎng)度的2/3,。
(7)空白實(shí)驗(yàn),。將滅菌后的斜面試管，各組隨機(jī)抽取幾支,，放在28～32℃溫箱中空白培養(yǎng)48～72h,，如無(wú)任何雜菌生長(zhǎng)，說(shuō)明滅菌*,，才可使用,。
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