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凱氏定氮采用的技術(shù)工作
閱讀：1078 發(fā)布時(shí)間：2019-4-23
凱氏定氮是測(cè)定化合物或混合物中總氮量的一種方法,。即在有催化劑的條件下,，用濃硫酸消化樣品將有機(jī)氮都轉(zhuǎn)變成無(wú)機(jī)銨鹽,，然后在堿性條件下將銨鹽轉(zhuǎn)化為氨,，隨水蒸氣蒸餾出來(lái)并為過(guò)量的硼酸液吸收,，再以標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定,，就可計(jì)算出樣品中的氮量,。由于蛋白質(zhì)含氮量比較恒定，可由其氮量計(jì)算蛋白質(zhì)含量,，故此法是經(jīng)典的蛋白質(zhì)定量方法,。
蛋白質(zhì)是含氮的有機(jī)化合物。蛋白質(zhì)與硫酸和催化劑一同加熱消化,，使蛋白質(zhì)分解,，分解的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。凱氏定氮然后堿化蒸餾使氨游離,，用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,，根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù)，并換算成蛋白質(zhì)含量,。
凱氏定氮注意
?。?） 樣品應(yīng)是均勻的。固體樣品應(yīng)預(yù)先研細(xì)混勻,，液體樣品應(yīng)振搖或攪拌均勻,。
（2） 樣品放入定氮瓶?jī)?nèi)時(shí),，不要沾附頸上,。萬(wàn)一沾附可用少量水沖下,，以免被檢樣消化不*，結(jié)果偏低,。
?。?） 消化時(shí)如不容易呈透明溶液，可將定氮瓶放冷后,，慢慢加入30%過(guò)氧化氫（H2O2）2-3ml,，促使氧化。
?。?） 在整個(gè)消化過(guò)程中,，不要用強(qiáng)火。保持和緩的沸騰,，使火力集中在凱氏瓶底部,，以免附在壁上的蛋白質(zhì)在無(wú)硫酸存在的情況下，使氮有損失,。
?。?） 如硫酸缺少，過(guò)多的硫酸鉀會(huì)引起氨的損失,，這樣會(huì)形成硫酸氫鉀,，而不與氨作用。因此,，當(dāng)硫酸過(guò)多的被消耗或樣品中脂肪含量過(guò)高時(shí),，要增加硫酸的量。
?。?） 凱氏定氮加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點(diǎn),，硫酸銅為催化劑，硫酸銅在蒸餾時(shí)作堿性反應(yīng)的指示劑,。
?。?） 混合指示劑在堿性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色,，在酸性溶液中呈紅色,。如果沒(méi)有溴甲酚綠，可單獨(dú)使用0.1%甲基紅乙醇溶液,。
?。?） 氨是否*蒸餾出來(lái)，可用PH試紙?jiān)囸s出液是否為堿性,。
?。?） 吸收液也可以用0.01當(dāng)量的酸代表硼酸，過(guò)剩的酸液用0.01N堿液滴定,，計(jì)算時(shí),，A為試劑空白消耗堿液數(shù),，B為樣品消耗堿液數(shù)，N為堿液濃度,，其余均相同,。
（10） 以硼酸為氨的吸收液,，可省去標(biāo)定堿液的操作,，且硼酸的體積要求并不嚴(yán)格，亦可免去用移液管,，操作比較簡(jiǎn)便,。
（11） 向蒸餾瓶中加入濃堿時(shí),，往往出現(xiàn)褐色沉淀物,，這是由于分解促進(jìn)堿與加入的硫酸銅反應(yīng)，生成氫氧化銅,，經(jīng)加熱后又分解生成氧化銅的沉淀,。有時(shí)銅離子與氨作用，生成深l藍(lán)色的結(jié)合物[Cu（NH3）4]2+
?。?2） 這種測(cè)算方法本質(zhì)是測(cè)出氮的含量,，再作蛋白質(zhì)含量的估算。只有在被測(cè)物的組成是蛋白質(zhì)時(shí)才能用此方法來(lái)估算蛋白質(zhì)含量,。