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凱氏定氮采用的技術(shù)工作
閱讀：1134 發(fā)布時間：2019-4-23
凱氏定氮是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法,。即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機(jī)氮都轉(zhuǎn)變成無機(jī)銨鹽，然后在堿性條件下將銨鹽轉(zhuǎn)化為氨，隨水蒸氣蒸餾出來并為過量的硼酸液吸收，再以標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定,，就可計(jì)算出樣品中的氮量。由于蛋白質(zhì)含氮量比較恒定,，可由其氮量計(jì)算蛋白質(zhì)含量,，故此法是經(jīng)典的蛋白質(zhì)定量方法。
蛋白質(zhì)是含氮的有機(jī)化合物,。蛋白質(zhì)與硫酸和催化劑一同加熱消化,，使蛋白質(zhì)分解，分解的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨,。凱氏定氮然后堿化蒸餾使氨游離,，用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù),，并換算成蛋白質(zhì)含量,。
凱氏定氮注意
（1） 樣品應(yīng)是均勻的,。固體樣品應(yīng)預(yù)先研細(xì)混勻,，液體樣品應(yīng)振搖或攪拌均勻。
?。?） 樣品放入定氮瓶內(nèi)時,，不要沾附頸上。萬一沾附可用少量水沖下,，以免被檢樣消化不*,，結(jié)果偏低。
?。?） 消化時如不容易呈透明溶液,，可將定氮瓶放冷后，慢慢加入30%過氧化氫（H2O2）2-3ml,，促使氧化,。
（4） 在整個消化過程中,，不要用強(qiáng)火,。保持和緩的沸騰,，使火力集中在凱氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白質(zhì)在無硫酸存在的情況下,，使氮有損失,。
（5） 如硫酸缺少,，過多的硫酸鉀會引起氨的損失，這樣會形成硫酸氫鉀,，而不與氨作用,。因此，當(dāng)硫酸過多的被消耗或樣品中脂肪含量過高時,，要增加硫酸的量,。
（6） 凱氏定氮加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點(diǎn),，硫酸銅為催化劑,，硫酸銅在蒸餾時作堿性反應(yīng)的指示劑。
?。?） 混合指示劑在堿性溶液中呈綠色,，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色,。如果沒有溴甲酚綠,，可單獨(dú)使用0.1%甲基紅乙醇溶液。
?。?） 氨是否*蒸餾出來,，可用PH試紙?jiān)囸s出液是否為堿性。
?。?） 吸收液也可以用0.01當(dāng)量的酸代表硼酸,，過剩的酸液用0.01N堿液滴定，計(jì)算時,，A為試劑空白消耗堿液數(shù),，B為樣品消耗堿液數(shù)，N為堿液濃度,，其余均相同,。
（10） 以硼酸為氨的吸收液,，可省去標(biāo)定堿液的操作,，且硼酸的體積要求并不嚴(yán)格，亦可免去用移液管,，操作比較簡便,。
?。?1） 向蒸餾瓶中加入濃堿時，往往出現(xiàn)褐色沉淀物,，這是由于分解促進(jìn)堿與加入的硫酸銅反應(yīng),，生成氫氧化銅，經(jīng)加熱后又分解生成氧化銅的沉淀,。有時銅離子與氨作用,，生成深l藍(lán)色的結(jié)合物[Cu（NH3）4]2+
（12） 這種測算方法本質(zhì)是測出氮的含量,，再作蛋白質(zhì)含量的估算,。只有在被測物的組成是蛋白質(zhì)時才能用此方法來估算蛋白質(zhì)含量。